[发明专利]抑制剂KN-93抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的方法及应用

说明书

本发明涉及一种钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN‑93抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的方法及应用，所述抑制剂KN‑93可用于制备抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的抗病毒药物。本发明在MARC‑145细胞或PAMs体外感染PRRSV过程中添加浓度为50μmol/L的KN‑93，与未加KN‑93处理组相比，添加有KN‑93处理组PRRSV的RNA含量和病毒滴度明显降低，可用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外感染。

技术领域

本发明涉及一种钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染中的应用，属于细胞生物学、病毒学技术领域。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称“猪蓝耳病”，是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus，PRRSV)感染引起的猪传染疫病，以母猪发热、厌食、早期流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍及各年龄阶段猪呼吸道疾病为主要特征。同时，PRRSV感染后可引起免疫抑制，进而导致猪继发多种病原的感染。PRRS对全球尤其是我国生猪产业造成了巨大的经济损失。

PRRSV是具有囊膜的单股正链RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Porartevirus)，主要感染猪肺泡巨噬细胞(porcinealveolar macrophages，PAMs)、非洲绿猴肾上皮细胞MARC-145等。目前，临床上尚无抗PRRSV感染特效药，PRRS防控主要使用灭活疫苗和弱毒疫苗进行免疫，其中弱毒疫苗在临床上使用较多。然而，灭活疫苗具有如下缺陷：(1)需要大剂量接种或应用浓缩抗原，免疫期短，常需强化接种；(2)不能引起局部免疫，以致细胞免疫的作用弱；(3)产生完全免疫力需要2-3周，不利于紧急预防接种与降低疫苗费用；(4)存在灭活不彻底和散毒的可能；弱毒疫苗存在毒力返强、重组、潜在感染的危险及无交叉保护力等。这些均阻碍了对PRRS的有效防控和传播，因此亟需研发PRRSV抗病毒药物。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的方法及应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93在抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染中的应用。

所述的抑制剂KN-93在抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的RNA含量中的应用。

所述的抑制剂KN-93在抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的病毒滴度中的应用。

所述的抑制剂KN-93在制备抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的抗病毒药物中的应用。

所述抑制剂KN-93的浓度为50μmol/L。

一种钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外感染的方法，具体步骤为：

(1)将MARC-145细胞按2.5×10⁵个/mL铺设24孔细胞培养板，每孔加入500μL DMEM培养基，于37℃、5％CO₂培养箱中培养12h；

(2)更换新的DMEM培养基，以病毒感染复数为1的PRRSV-2BJ-4毒株于37℃孵育MARC-145细胞3h；弃细胞上清，用PBS缓冲液洗细胞三次，洗去未侵入细胞的病毒粒子；

(3)向细胞培养板孔中加入含50μmol/LKN-93的500μLDMEM培养基，于37℃继续培养9h或45h。

所述DMEM培养基含10％(v/v)热灭活胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素。