[发明专利]一种利用氧气冷等离子体诱变创制结缕草突变体的方法

说明书

本发明提供了一种利用氧气冷等离子体诱变创制结缕草突变体的方法，涉及诱变育种技术领域。本发明所述方法，将冷等离子体技术应用于结缕草体细胞诱变过程中，显著提高了结缕草的诱变频率，降低了育种成本，加快了结缕草育种进程，为其他植物体细胞诱变育种提供借鉴，具有绿色、高效、操作简单等优良特性，在生物诱变育种领域具有广泛的应用前景。利用本发明所述方法，变异频率较常规诱变育种显著提高，可达到19.1％。

技术领域

本发明属于诱变育种技术领域，具体涉及一种利用氧气冷等离子体诱变创制结缕草突变体的方法。

背景技术

结缕草属(Zoysis Willd.)植物是禾本科画眉草亚科的多年生草本植物，是一种优良的暖季型草坪草和牧草，广泛应用于国内外暖温带到热带区域的园林绿化、运动场、固土护坡和盐碱地绿化草坪建植，具有重要的坪用、水土保持和饲用价值。然而结缕草生长速度缓慢严重阻碍了结缕草产业的发展。目前，结缕草新品种培育以系统选育、杂交育种为主，育种周期长效率低，严重阻碍了结缕草育种进程，如何快速选育速生优质品种一直是结缕草育种的科学难题。结缕草可育种子较少，种皮较厚，且营养体表皮也较厚，常规的方法很难达到良好的诱变效果。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用氧气冷等离子体诱变创制结缕草突变体的方法，所述方法成本低、安全环保、诱变效率高，在较短时间内可获得优良突变体。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种利用氧气冷等离子体诱变创制结缕草突变体的方法，包括以下步骤：(1)利用结缕草的幼嫩分蘖芽诱导体细胞组织，对诱导得到的体细胞组织进行冷等离子体诱变，得诱变体；所述冷等离子体诱变在真空条件下进行，且在进行诱变时通入放电气体氧气10～12min，压强为15～30Pa，处理功率为600～750W，诱变8～12min；

(2)将所述诱变体依次进行分化培养和生根培养，得诱变植株；

(3)对所述诱变植株进行表型和SRAP分子鉴定，得变异植株；对所述变异植株进行扦插繁殖，鉴定突变性状，获得稳定遗传的突变体。

优选的，步骤(1)所述诱导包括将消毒后的幼嫩分蘖芽接种到诱导培养基中进行诱导，获得体细胞组织；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2,4-D 6～8mg/L、L-脯氨酸4～5g/L、5-氨基乙酰丙酸5～7mg/L、VB₁2～3mg/L、蔗糖25～30g/L和植物凝胶3～5g/L。

优选的，步骤(1)所述诱导在暗环境中进行，温度为25±1℃，诱导的时间为20～30d。

优选的，所述消毒包括：用质量百分含量为15％的H₂O₂水溶液浸泡所述幼嫩分蘖芽10～15min，蒸馏水冲洗3～5min，然后用体积百分含量为50％的乙醇水溶液浸泡8～12min，蒸馏水冲洗10～15min。

优选的，步骤(1)所述等离子体诱变时，取直径0.4～0.7cm的颗粒状体细胞组织，置于直径6cm的石英玻璃培养皿中，将培养皿置于射频放电两块极板中间，距电极板的距离为1～2cm。

优选的，步骤(2)所述分化培养为暗培养，所述暗培养的温度为25±1℃，暗培养的时间为30d；

所述分化培养用培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：NAA0.3～0.5mg/L、5-氨基乙酰丙酸1～3mg/L、蔗糖25～30g/L和植物凝胶3～5g/L。

优选的，步骤(2)所述生根培养为光暗交替培养，光周期为12h/d，光照强度为2000～2500Lx，所述生根培养的温度为25±1℃，培养时间为10～15d；