[发明专利]一种引物组、试剂盒及其在快速鉴定花椒根腐病菌中的应用

说明书

本发明涉及分子检测技术领域，公开了一种引物组以及包含该引物组的试剂盒；所述引物组包括上游引物F1和下游引物R1，序列如下：上游引物F1：5'‑CGTGTCGCAGAAGAGGG‑3'；下游引物R1：5'‑AATAGGAAGCCGCTGAGC‑3'；本发明还公开了该引物组或试剂盒在快速鉴定花椒根腐病菌中的应用，包括以下步骤：S1.提取样本DNA；S2.以所述样本DNA为模板，利用所述引物组进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；S3.分析PCR扩增产物；本发明的引物组能够特异性鉴定腐皮镰刀菌，达到了扩增效率高、特异性强和准确度高的特点；同时，结合所述引物组建立的快速鉴定方法相当简单，无需进行形态鉴定和DNA测序，即可对腐皮镰刀菌进行鉴定。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，具体是一种引物组、试剂盒及其在快速鉴定花椒根腐病菌中的应用。

背景技术

花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim)是芸香科、花椒属落叶小乔木，耐旱，喜阳光，各地多栽种。花椒的果皮可作为调味料，并可提取芳香油，又可入药，种子可食用，也可加工制作肥皂。

根腐病是一种真菌引起的病，该病会造成根部腐烂，吸收水分和养分的功能逐渐减弱，最后全株死亡，主要表现为整株叶片发黄、枯萎。花椒根腐病主要是由腐皮镰刀菌引起的一种土传病害，常发生在苗圃和成年花椒果树园中，受害植株根部变色腐烂，有异臭味，根皮与木质部脱离，木质部呈黑色；地上部分叶形小而色黄，枝条发育不全，严重时全株死亡。该病可导致老椒园不能继续栽植花椒，严重制约花椒产业的健康持续发展。

目前，鉴定花椒腐皮镰刀菌的方法主要是通过将感病植株的根部组织进行消毒处理和病原菌分离，在获得纯化菌株后进行室内离体培养，再对分生孢子的形状、大小等形态特征进行观察，从而确定其病原为腐皮镰刀菌。然而，由于镰刀菌属的种类繁多，部分镰刀菌存在多个专化型，种间形态学特征较为接近，仅以形态特征对腐皮镰刀菌进行鉴定不仅操作方法复杂，鉴定结果也不够准确。

因此，我们亟需一种快速鉴定花椒中腐皮镰刀菌，并且操作简单、准确性和特异性强的方法。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术的不足，提供一种引物组，以至少达到适用于花椒中腐皮镰刀菌的鉴定，并且操作简单、准确性和特异性强的效果。

上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种引物组，包括上游引物F1和下游引物R1，所述引物组的序列如下：

上游引物F1：5'-CGTGTCGCAGAAGAGGG-3'；

下游引物R1：5'-AATAGGAAGCCGCTGAGC-3'。

本发明的目的之二在于提供包含上述引物组的试剂盒。

本发明的目的之三在于提供上述引物组或试剂盒在快速鉴定花椒根腐病菌中的应用。

在某些实施方案中，所述花椒根腐病菌为腐皮镰刀菌。

在某些实施方案中，所述快速鉴定腐皮镰刀菌的方法，包括以下步骤：

S1.提取样本DNA；

S2.以所述样本DNA为模板，利用所述引物组进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；

S3.分析所述PCR扩增产物。

在某些实施方案中，以25μL计，所述PCR扩增反应的反应体系为：

在某些实施方案中，所述上游引物F1和下游引物R1的浓度均为10μmol/L。

在某些实施方案中，所述样本DNA的浓度为50ng/μL。