[发明专利]一种NT-proBNP定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

一种NT‑proBNP定量检测试剂盒及其制备方法，包括芯片和试剂，芯片包括芯片基板和芯片盖板；芯片基板上依次设有加样区、反应区、检测区以及废液池；加样区与反应区通过过滤通道连通，过滤通道内设置有滤血膜；反应区与检测区通过反应通道连通，反应通道内设置有第一限流柱，第一限流柱为弯曲形结构，且弯曲方向沿着反应通道的宽度方向延伸；检测区与废液池通过废液通道连通，废液通道与废液池连通处设置有第二限流柱，第二限流柱呈波浪形结构、且朝向废液池端有凸起；反应区包被有荧光微球标记的NT‑proBNP抗体I，检测区固定有NT‑proBNP抗体II；芯片盖板上设有加样孔、检测窗口和气孔。具有检测快捷简便，且能大大提高检测灵敏度和准确率的优点。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体的涉及一种NT-proBNP(N端脑钠肽前体)定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide)主要来源于心室，是判断慢性心力衰竭严重程度和预后的良好血清标志物。正常情况下只有少量的BNP储存在心肌细胞，其分泌取决于BNP基因的激活。当心房颤动、心脏瓣膜病、心室容量负荷增加、肺动脉高压、左右心室大小和功能变化、冠心病等临床相关因素导致心室肌伸展或缺血时，心肌细胞的BNP基因被激活，首先生成含134个氨基酸的前BNP原，该蛋白质的信号肽被切除后成为含有108个氨基酸的前体肽proBNP；前体肽在内切酶作用下很快分解为含有32个氨基酸的BNP和含有76个氨基酸的NT-proBNP。左心室收缩加强，心室容量负荷增加，心肌细胞伸展是刺激BNP和NT-proBNP生成的主要因素。NT-BNP生物半衰期是60-120分钟，相比生物半衰期仅为20分钟的BNP要长的多。心力衰竭时，血浆BNP水平随心力衰竭严重程度明显升高，血浆NT-proBNP水平也相应升高，而且血浆NT-proBNP增高的比例及绝对值均超过BNP，因此，作为早期心功能损害的标志物，NT-proBNP可能更为敏感。

NT-proBNP是重要的心脏功能标志物，在临床上除了是急、慢性心脏衰竭排除诊断的重要参数，对于心衰患者的预防筛查、疗效检测、预后评估及危险分层等方面均具有广泛应用。尤其在当下我国老龄化趋势愈加严重、心衰危险因素流行增加造成心力衰竭发病率持续升高的背景下，NT-proBNP用于心衰高风险人群的筛查对于心衰的及时预防、早期发现及有效管理，从而降低心衰的发病率及死亡率具有重要意义。

检测NT-proBNP可用多种方法，目前市场上检测NT-proBNP较特异、敏感的方法是免疫学检测。常见的免疫检测学方法主要有：酶免法、免疫荧光法、免疫化学发光法和免疫金标技术法等。酶免法运用双单克隆抗体，检测人工合成NT-proBNP，方法较特异，无交叉反应，但此方法操作繁琐，费用高，不适用于床边快速检验。目前市场上常用的有梅里埃VIDAS系统的酶联荧光法，线性范围在0-200ng/ml，分析灵敏度在0.05ng/ml。免疫荧光法，是一种定量的免疫荧光检测方法，两种鼠单克隆抗体与NT-proBNP抗原的两个不同的结合位点结合，一种抗体经荧光标记(示踪剂)。另一种固定在试管壁。抗体与血浆或血清中的NT-proBNP分子反应形成“夹心复合物”，荧光标记抗体被缚在试管壁上，通过发光试剂记数荧光标志物的含量，荧光信号的强度与标本NT-proBNP浓度成正比，同时测定标准品，根据已知抗原浓度的NT-proBNP制成标准曲线后，可以定量得到标本的NT-proBNP浓度。免疫化学发光法是在放射免疫法和酶免法两种方法基础上改进的一种新方法，无放射性和致畸物质，兼具有以上两种方法的优点，且产品有效期长、对环境无污染、对人体无毒无害，是目前体外诊断试剂检测方法中的佼佼者，在技术上具有明显的优势，但缺点同样是操作繁琐，耗时长，且费用高，不适合床边的快速检验。

微流控芯片技术(Microfluidics)是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上，自动完成分析全过程。微流控芯片具有的精确流体控制、少量样品需求、快速反应及大规模集成的优势，使其成为临床诊断及疾病筛查的极具发展潜力的工具。因此，建立一种检测NT-proBNP的微流控芯片技术平台具有十分重要的意义。

发明内容