[发明专利]一种NT-proBNP定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括芯片和设置于芯片功能区上的试剂，所述的芯片包括芯片基板和芯片盖板，并由两者键合而成；所述的芯片基板上依次设有加样区、反应区、检测区以及废液池；所述的加样区与反应区通过过滤通道连通，过滤通道内设置有滤血膜；所述的反应区与检测区通过反应通道连通，反应通道内设置有第一限流柱，所述的第一限流柱为弯曲形结构，且弯曲方向沿着反应通道的宽度方向延伸；所述的检测区与废液池通过废液通道连通，所述的废液通道与废液池连通处设置有第二限流柱，所述的第二限流柱呈波浪形结构、且朝向废液池端有凸起；所述的反应区包被有荧光微球标记的NT-proBNP抗体I，检测区固定有NT-proBNP抗体II；所述的芯片盖板上设有加样孔、检测窗口和气孔；加样孔与加样区、检测窗口与检测区依次对应，气孔与外界连通。

2.根据权利要求1所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的第一限流柱为一条，其长度沿着反应区与检测区相互连通的反应通道的方向延伸，且该一条第一限流柱是由多个圆柱形柱子组成的弯曲状，相邻圆柱形柱子之间具有缝隙，介质在圆柱形柱子件的缝隙流通。

3.根据权利要求1所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的第一限流柱设置有5个弯折部，且五个弯折部依次相反方向凸出。

4.根据权利要求1所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的滤血膜填充于加样区与反应区之间的过滤通道内、并与过滤通道的内壁相互贴合，且滤血膜的长度大于过滤通道长度的一半。

5.根据权利要求1所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的第二限流柱呈波浪形，并沿着废液通道的宽度方向延伸，且第二限流柱与芯片盖板之间设置有间隙，该间隙供介质流出至废液池中；且废液通道内为负压条件以实现介质向着废液池方向流动。

6.根据权利要求5所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的第二限流柱位于废液通道的底端，其高度自芯片基板侧至芯片盖板侧延伸，并与芯片盖板之间设置有间隙；其长度沿着废液通道的底端宽度方向延伸并连接于废液通道底端宽度方向的两侧壁上。

7.根据权利要求1所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的芯片基板和芯片盖板为聚甲基丙烯酸甲酯、聚二甲基硅氧烷和聚四氟乙烯中的一种材料制备而成。

8.根据权利要求2所述的NT-proBNP定量检测试剂盒，其特征在于：所述的圆柱形柱子的轴向与介质的流动方向垂直。

9.一种权利要求1-8任一权利要求所述的NT-proBNP试剂盒的制备方法，其特征在于：具体步骤包括：

(1)将芯片基板进行等离子处理，改变芯片基板表面性质，增加亲水性；

(2)将固相表面的多余位点用封闭剂将其封闭，防止抗体或者抗原与固相表面发生非特异性结合；

(3)荧光微球标记NT-proBNP抗体I，并将荧光微球标记的NT-proBNP抗体I包被于反应区；

(4)将NT-proBNP抗体II包被于检测区；

(5)将滤血膜放置于过滤通道内；

(6)通过键合，将芯片基板与芯片盖板结合在一起；

(7)检测：将全血样品从加样孔加入反应区，通过滤血膜过滤，随后样本进入到反应区；在反应区中，样本中的抗原与荧光微球标记NT-proBNP抗体I反应结合后，进入检测区；在检测区中，复合物与固定在检测区的NT-proBNP抗体II结合，形成NT-proBNP抗体I-NT-proBNP抗原-NT-proBNP抗体II的双抗体夹心复合物，并固定在检测区；而没有结合固定的样品，则继续流动至废液池中；最后通过荧光检测仪进行检测，通过检测与NT-proBNP抗体I相连的荧光微球的荧光强度，来反应待测样本浓度，荧光强度与待测样本浓度呈正相关。

10.根据权利要求9所述的NT-proBNP试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(3)中荧光微球标记NT-proBNP抗体I方法如下：将荧光微球用0.05mol/L MES缓冲液(pH6.0)稀释至1mg/mL，后加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应30min，得到活化的荧光微球溶液；将NT-proBNP抗体I溶于0.01mol/L PBS缓冲液(pH7.4)中，得到浓度为0.1mg/mL的NT-proBNP抗体I溶液，并将其加入到上述荧光微球溶液中，室温下反应2小时，离心并用0.01mol/L PBS缓冲液(pH7.4)清洗3次，此时NT-proBNP抗体I已与荧光微球结合形成NT-proBNP抗体I—荧光微球复合物。