[发明专利]一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法及应用

说明书

本发明公开了一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法及应用，本发明能够以低成本，更短的周期来快速建立II型糖尿病斑马鱼模型，其制备的模型稳定，其可用于糖尿病病理机制研究材料，也可以作为各种治疗Ⅱ型糖尿病药物筛选与评价的动物模型，可有效地提高动物模型实验效率和降低实验成本。

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，具体涉及一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法及应用。

背景技术

随着人类生活条件的日益改善，代谢类疾病成为人类健康的重大威胁，其中糖尿病作为全球流行性代谢类疾病，患病率呈逐年升高趋势，并成为致死和致残的重要原因，对糖尿病的研究一直是一项世界性的课题。

糖尿病作为一种多病因引起、以慢性高血糖为特征的终身性代谢疾病，对人类的生命健康造成极大威胁，然而糖尿病的病因至今不明，因此，探索糖尿病的发病机理成为当今科研及医疗人员的聚焦热点。传统的研究糖尿病的动物模型有兔及大、小鼠，这些动物模型虽然能够开展科研探索实验并模拟人类Ⅱ型糖尿病，但大多构建成本高、时间周期长、数量少及操作较为复杂。

而斑马鱼是常见的热带鱼类，与人类基因同源性高达87％，与人具有高度的生物相似性，这意味着其实验结果大多数情况下适用于人体。它们体形微小，长度小于5cm，不占用空间，与大鼠或小鼠相比饲养更为方便。斑马鱼的繁殖周期短，交配无季节性，产卵多，胚胎发育迅速，受精后24小时即可完成身体内部器官的构建，且胚胎透明易于观察。自20世纪80年代首次用作模式生物以来，其被广泛用于生态毒理学、发育遗传学、人类疾病动物模型、药物代谢及药物筛选研发等多个方面。

而且较小鼠等模式生物，斑马鱼用于慢病药物药理实验优势明显。首先，斑马鱼慢病模型建立时间短。相比于小鼠等需要数月构建糖尿病等疾病模型，斑马鱼只需要数天时间即可形成具有典型疾病特点的病理模型，可极大节省时间、经费、精力。其次，斑马鱼构建慢病模型治疗周期短。同样地，相比于小鼠等模式动物，斑马鱼仅需数天给药即可引发明显的病理状态改变，可以有效减少实验周期。同时，使用斑马鱼也可模拟慢病复杂用药的特点。再次，斑马鱼饲养空间成本低，相比于小鼠等模式动物，斑马鱼饲养条件相对简单，占地面积少，病例模型构建所需场地小。除此之外，斑马鱼给药方式简单，可以直接将药物溶于水中，斑马鱼可通过皮肤、鳃、消化系统等来吸收。

因此，一种价格低、生长周期短、繁育简便、操作简单的Ⅱ型糖尿病动物药物评价模型亟待研究。

发明内容

因此，基于以上背景，本发明提供一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法，其模型构建周期短，繁育简便，操作简单，可大大降低模型构建与动物模型实验成本。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法，其构建步骤如下：

S1：挑选3月龄期的斑马鱼若干条，分为两组，分别为对照组和实验组，所述对照组和实验组的数量一致；

S2：对照组斑马鱼喂养的饲料为活体丰年虫，系统循环水培育；实验组斑马鱼喂养的饲料为高糖高脂饲料，葡萄糖水和系统循环水进行交替培育；

S3：15天后，分别在进食后的0.5小时和12小时后对实验组和对照组的马鱼取血进行血糖检测；实验组的斑马鱼0.5小时和12小时后的血糖数据均为对照组的2倍以上，则II型糖尿病斑马鱼模型构建成功。

进一步地，步骤S2中的高糖高脂饲料的制备方法为：将煮熟后用烘箱55℃烘6小时后的鸡蛋黄和用研磨机磨成细粉的胆固醇以重量比为9:1混合，拌匀，然后用真空冻干机冻干10小时，取出即可。

进一步地，步骤S2中葡萄糖的为浓度为1％的葡萄糖。

进一步地，步骤S2中的交替时间为24小时。

进一步地，步骤S3中斑马鱼取血进行血糖检测的步骤为：