[发明专利]一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法

说明书

本发明涉及一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，属于生物制品的提取制备技术领域。操作步骤包括以绿僵菌属的真菌培养菌种，扩大培养收集孢子，孢子除杂，制备色素粗提液，浓缩干燥，精制色素沉淀物，将精制色素沉淀物干燥得到墨绿色粉末状的天然绿色色素。本发明解决了绿僵菌绿色真菌色素无法提取的问题，为进一步的结构鉴定和利用奠定了基础。本发明提取的天然绿色色素稳定性优于目前天然绿色色素中普遍应用的叶绿素，具有广泛的应用前景。本发明工艺简便稳定、生产设备投资规模可控，生产灵活，可规模化生产。

技术领域

本发明属于生物制品的提取制备技术领域，具体涉及从绿僵菌孢子中提取绿色色素的工艺方法。

背景技术

绿僵菌的孢子呈现绿色，但其绿色色素至今未得到分离鉴定，其主要原因是目前常用的天然色素提取方法均无法从绿僵菌中提取出绿色色素。只有将该绿色色素提取出来，才可为其分子结构与代谢通路的鉴定，及商品化应用奠定基础。

目前合成色素对消费者和环境的有害影响受到普遍的关注，寻求天然色素作为合成色素的代替品正成为研究热点。世界范围内对天然着色剂的需求在食品、化妆品和纺织行业迅速增长。

目前，通过植物和微生物生产的色素和着色剂是现代色素工业开发的主要来源。天然色素中，黄色色素和红色色素较多，但绿色色素除叶绿素外，其它种类较少。并且，天然叶绿素脱离植物细胞后易受环境中的光照、温度、氧化剂等因素的影响而被破坏，性质不稳定，因此亟需一种环境耐受更佳的天然绿色色素作为叶绿素的替代品。本发明的绿僵菌绿色色素，是从绿僵菌孢子中，通过除杂等方法提取。该色素在光照时不易降解，在室温下放置一年，色素保存率仍在80%以上。染色后不易被水、有机溶剂和洗涤剂洗掉。

发明内容

本发明的目的是提供一种绿僵菌属真菌中的天然绿色色素的提取方法。

一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取操作步骤如下：

（1）菌种筛选

将绿僵菌属（Metarhizium）真菌接种于PDA培养基上，在20～30℃条件下，培养3～7天，获得固体菌种；

（2）扩大培养

将所述固体菌种接入PDB液体培养基中，在转速150～250转/分钟条件下，21～30℃摇瓶培养2～6天，按1～10%体积重量比接种到大米培养基中进行培养，培养8～16天，得到大米培养物；

（3）孢子收集

将大米培养物在-50～130℃干燥，使用收孢机或旋风分离器收取孢子；

（4）孢子除杂

按重量体积比1g ：0.5～5 mL，在孢子中加入除杂剂1号，在温度10～50℃、第一次回流提取30～600分钟，提取液回收用于下一批样品处理，第一次固体部分按重量体积比1g ：0.5～5 mL，加入除杂剂2号，第二次回流提取30～600分钟，提取液回收用于下一批样品处理，第二次固体部分再按重量体积比1g ：0.5～5 mL，加入除杂剂3号，搅拌均匀，在温度20～90℃、超声提取20～400分钟，然后过滤或离心，弃去滤液或离心上清，获得除杂孢子；

（5）制备粗提液

将除杂孢子按重量体积比1g ：0.5～5 mL加入提取剂，搅拌或者超声提取2～10小时，过滤或离心，滤液或离心上清即为色素粗提液；

（6）浓缩干燥

将色素粗提液减压浓缩，减压干燥即得到色素粗提物；

（7）精制色素沉淀