[发明专利]一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法

权利要求书

1.一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）菌种筛选

将绿僵菌属的真菌接种于PDA培养基上，在20～30℃条件下，培养3～7天，获得固体菌种；

（2）扩大培养

将所述固体菌种接入PDB液体培养基中，在转速150～250转/分钟条件下，21～30℃摇瓶培养2～6天，按1～10%体积重量比接种到大米培养基中进行培养，培养8～16天，得到大米培养物；

（3）孢子收集

将大米培养物在-50～130℃干燥，使用收孢机或旋风分离器收取孢子；

（4）孢子除杂

按重量体积比1g ：0.5～5 mL，在孢子中加入除杂剂1号，在温度10～50℃、第一次回流提取30～600分钟，提取液回收用于下一批样品处理，第一次固体部分按重量体积比1g ：0.5～5 mL，加入除杂剂2号，第二次回流提取30～600分钟，提取液回收用于下一批样品处理，第二次固体部分再按重量体积比1g ：0.5～5 mL，加入除杂剂3号，搅拌均匀，在温度20～90℃、超声提取20～400分钟，然后过滤或离心，弃去滤液或离心上清，获得除杂孢子；

除杂剂1号配方为：按体积比由乙酸乙酯或三氯甲烷：石油醚为0.1～3：3～0.1配制成；

除杂剂2号配方为：按体积比由甲醇或乙醇：丙酮为0.1～3：3～0.1配制成；

除杂剂3号配方为：按体积比由水：二甲基亚砜为1：0～0.1配制成；

过滤的滤膜为100～600目滤膜；离心条件为：离心转速5000～20000转/分钟、时间5～20分钟；

（5）制备粗提液

将除杂孢子按重量体积比1g ：0.5～5 mL加入提取剂，搅拌或者超声提取2～10小时，过滤或离心，滤液或离心上清即为色素粗提液；

提取剂配方为：按体积比由甲酸：乙醇为1：0～1配制成的混合液；过滤的滤膜为100～600目滤膜；离心条件为：离心转速5000～20000转/分钟、时间5～20分钟；

（6）浓缩干燥

将色素粗提液减压浓缩，减压干燥即得到色素粗提物；

（7）精制色素沉淀

采用去杂法进行精制：用提取剂将色素粗提物溶解，加入1～20倍体积的除杂剂3号使色素沉淀，离心或过滤出沉淀；第二次用提取剂复溶，然后加入1～15倍体积的除杂剂2号使色素沉淀，离心或过滤出沉淀；第三次用提取剂复溶，加入1～10倍体积的除杂剂1号使色素沉淀，离心去除上清，得到精制色素沉淀；

（8）色素干燥

将精制色素沉淀在压力小于或等于-0.1MP，温度-50～120℃条件下，干燥，得到色素精制品，即天然绿色色素，为墨绿色粉末。

2.根据权利要求1所述的一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，其特征在于：所述绿僵菌属的真菌为金龟子绿僵菌、罗伯茨绿僵菌、蝗绿僵菌中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，其特征在于：步骤（1）中，PDA培养基即马铃薯葡萄糖培养基，其配方为：6g马铃薯干粉或20g去皮鲜马铃薯，20g葡萄糖，15g琼脂，加水至1000mL。

4.根据权利要求1所述的一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，其特征在于：步骤（2）中，PDB培养基的配方：6g马铃薯干粉或20g去皮鲜马铃薯，20g葡萄糖，加水1000mL；大米培养基为在水中浸泡10～100 mim、并高压灭菌的大米。

5.根据权利要求1所述的一种绿僵菌中的天然绿色色素的提取方法，其特征在于：步骤（6）中，所述减压浓缩条件：压力小于或等于-0.08MP、温度20～98℃；减压干燥条件：压力小于或等于-0.1MP、温度-50～120℃。