[发明专利]高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法，包括载体，所述载体上设有标记区、T位点和C位点，所述标记区固定干燥有信号粒子标记的SARS‑CoV‑2重组抗原，T位点包被有竞争性物质，所述竞争性物质为与信号粒子标记的SARS‑CoV‑2重组抗原特异性反应的受体蛋白，C位点包被有SARS‑CoV‑2重组抗体。本发明可减少中和抗体的抱团效应，增大竞争性物质的位阻效应，有利于中和抗体和SARS‑CoV‑2重组抗原的结合，提高检测灵敏度和准确度，测定的样本种类多，适应不同场合，操作方便，用户体验便捷。

技术领域

本发明属于免疫荧光检测技术领域，尤其是涉及一种高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法。

背景技术

血管紧张素转化酶2(Angiotensin Converting Enzyme 2，ACE2)是一种Ⅰ型跨膜蛋白，是SARS-CoV-2感染人体，进入细胞的重要靶点。SARS-CoV-2通过表面的S-蛋白与人上皮细胞的ACE2结合，侵入细胞后利用细胞内的物质进行复制繁衍，即新型冠状病毒S蛋白受体结合域(receptor binding domain，RBD)可与病毒与宿主细胞表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合。当SARS-CoV-2在侵入机体时，会刺激机体产生具有保护作用的中和抗体，专门阻止病原微生物进入细胞，防止感染。中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白，具有识别病毒表面蛋白、阻断其与细胞表面特异性受体结合的功能，从而发挥抗病毒作用。中和抗体的多少是疫苗免疫保护效果的一项重要指标，是疫苗评估和质控的重要依据。

西湖大学研究团队发现AXL是新冠病毒感染人类呼吸系统的潜在受体，研究团队发现新冠病毒在人类呼吸系统中可能存在其他重要受体。研究团队证明肺细胞上的AXL蛋白与新冠病毒刺突蛋白相结合，并在细胞膜上存在强共定位。且与呼吸系统上皮细胞结合强度排名前三的候选受体分别为：AXL蛋白、EGFR蛋白和LDLR蛋白。

目前已经建立的冠状病毒中和抗体检测方法有双抗原夹心法、间接法和竞争法。其中双抗原夹心法与间接法检测的是总抗体含量，不能针对性反应样本中的中和抗体含量。目前已公开专利中，竞争法检测中和抗体含量多为常规竞争的方式。例如，公告号为CN111781354B的已授权专利公开了新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒。现有技术多为：标记抗原，包被受体蛋白，样本中的中和抗体与受体蛋白直接竞争抗原，通过结合的数量反应中和抗体的含量。该方法提供的主要为直接并同时竞争的内环境，存在的问题有：对于低滴度的中和抗体，竞争优势不显著，灵敏度较低，对于较高滴度的中和抗体，竞争梯度小，容易造成检测结果偏差大等问题。同时目前已知的免疫学检测中，中和抗体检测均为通过抗体浓度或数量的结合，反应中和抗体的浓度，同时现有技术多用于酶免、胶体金法等试剂盒的检测，采用微流控免疫荧光法实现快速检测，目前未见到。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一是发明一种高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒(微流控法)，二是发明一种高灵敏度的新型冠状病毒中和抗体间接竞争检测方法，以克服现有的新冠中和抗体灵敏度低的问题，准确检测受试者体内的中和抗体含量，准确评估新冠疫苗的有效性。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，包括载体，所述载体上设有标记区、T位点和C位点，所述标记区固定干燥有信号粒子标记的SARS-CoV-2重组抗原，T位点包被有竞争性物质，所述竞争性物质为与信号粒子标记的SARS-CoV-2重组抗原特异性反应的受体蛋白，C位点包被有SARS-CoV-2重组抗体。

优选的，所述SARS-CoV-2重组抗原包括S蛋白全长片段或S蛋白部分片段，优选S-RBD蛋白。

新型冠状病毒入侵宿主是通过表面的S蛋白与宿主细胞结合，而最主要的功能位点是S蛋白上的受体结合域即S-RBD，S-RBD蛋白直接与中和抗体结合，亲和力更高。