[发明专利]高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：包括载体，所述载体上设有标记区、T位点和C位点，所述标记区固定干燥有信号粒子标记的SARS-CoV-2重组抗原，T位点包被有竞争性物质，所述竞争性物质为与信号粒子标记的SARS-CoV-2重组抗原特异性反应的受体蛋白，C位点包被有SARS-CoV-2重组抗体。

2.根据权利要求1所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2重组抗原包括S蛋白全长片段或S蛋白部分片段，优选S-RBD蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2重组抗原混合有具有高免疫原性的结构蛋白，所述结构蛋白包括新型冠状病毒的N蛋白、E蛋白、M蛋白中的至少一种，混合方式为SARS-CoV-2重组抗原和结构蛋白混匀后与信号粒子进行标记、SARS-CoV-2重组抗原和结构蛋白分别与信号粒子标记后进行混匀、SARS-CoV-2重组抗原与信号粒子进行标记后再在其中直接添加结构蛋白中的一种。

4.根据权利要求3所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2重组抗原的标记浓度为0.5-2mg/mL，结构蛋白的浓度为1-3mg/mL。

5.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述竞争性物质包括ACE2蛋白、AXL蛋白、EGFR蛋白、LDLR蛋白的至少一种，优选ACE2蛋白或AXL蛋白，标记浓度优选0.05-0.5mg/ml。

6.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述竞争性物质包被到T位点的方式有以下两种：

A、通过生物素化的受体蛋白抗体将受体蛋白包被在微流控芯片上，即形成亲合素/链霉亲合素-受体蛋白抗体-受体蛋白偶联物，受体蛋白抗体的浓度为5-50μg/mL，受体蛋白的浓度为2-40μg/mL；

B、通过生物素-亲合素/链霉亲合素系统将受体蛋白包被在基片上，即形成亲合素/链霉亲合素-生物素-亲合素/链霉亲合素-受体蛋白。

7.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的信号粒子包括荧光粒子、磁微粒、乳胶微粒的至少一种，其中荧光粒子包括荧光素填充微球、时间分辨荧光微球、量子点荧光微球的至少一种，所述信号粒子粒径在100-1000nm范围内。

8.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述SARS-CoV-2重组抗体为生物素化的S-RBD抗体，浓度为2-80μg/mL，所述T位点和C位点预先包被有亲合素/链霉亲和素，亲合素/链霉亲和素的浓度为5mg/mL。

9.根据权利要求1或2所述的高灵敏的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于：所述载体包括微流控芯片或层析试纸，所述试剂盒的样本为血液样本，所述血液样本为指尖血、静脉血、血清或血浆，加样量为30-40μL。

10.高灵敏的新型冠状病毒中和性抗体免疫荧光检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：使血液样本流经固定干燥有信号粒子标记的消耗性物质的区域，所述消耗性物质为SARS-CoV-2重组抗原和/或结构蛋白，所述结构蛋白包括新型冠状病毒的N蛋白、E蛋白、M蛋白中的至少一种，血液样本中的一部分中和抗体与消耗性物质偶联形成中和抗体-消耗性物质-信号粒子；

S2：使S1得到的血液样本流经包被有竞争性物质的T检测区，其中，所述竞争性物质为与信号粒子标记的SARS-CoV-2重组抗原特异性反应的受体蛋白，未结合中和抗体的信号粒子与竞争性物质偶联；

S3：使S2得到的血液样本流经包被有SARS-CoV-2重组抗体的C检测区，未与竞争性物质结合的信号粒子与SARS-CoV-2重组抗体偶联；

S4：检测T检测区和C检测区的信号值，分别记为T信号值和C信号值，计算T信号值/C信号值的比值即为检测结果。