[发明专利]一种富硒茶树中硒形态测定的方法及应用

权利要求书

1.一种富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述富硒茶树中硒形态测定方法包括：

配制KBH₄溶液、KI溶液、HCl溶液、混合标准工作溶液；

预处理样品，制备样品溶液；

使用液相色谱原子荧光联用仪分析参考条件；

对混合标准工作溶液和样品溶液中各硒形态进行定性分析；

根据标准曲线对样品溶液色谱图中相应的峰面积进行定量测定。

2.如权利要求1所述的富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述KBH₄溶液、KI溶液、HCl溶液的配制包括：

2％KBH₄溶液：称取20g KBH₄，3g KOH，溶于1000mL的超纯水；

1％KI溶液：称取10g KI，2g KOH，溶于1000mL的超纯水；

20％HCl溶液：量取200mL的HCl溶于超纯水，定容至1000mL。

3.如权利要求1所述的富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述混合标准工作溶液的配制包括：

五种形态硒的标准品：44.2μg/g硒代胱氨酸[SeCys₂]标准溶液、34.8μg/g甲基硒代半胱氨酸[SeMeCys]标准溶液、39.4μg/g硒代蛋氨酸[SeMet]标准溶液；42.9μg/g亚硒酸根[Se(IV)]标准溶液、41.5μg/g硒酸根[Se(VI)]标准溶液；

混合标准中间液：分别准确吸取硒代胱氨酸[SeCys₂]标准溶液226.24μL、甲基硒代半胱氨酸[SeMeCys]标准溶液287.36μL、硒代蛋氨酸[SeMet]标准溶液253.81μL、亚硒酸根[Se(IV)]标准溶液233.10μL和硒酸根[Se(VI)]标准溶液240.96μL于10mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，配置成浓度为1mg/L的硒混合标准储备液；

混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液各1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于50mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀后作为系列混合标准工作溶液，各混合标准工作溶液浓度依次为20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L。

4.如权利要求1所述的富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述样品预处理方法包括：将富硒茶树组织样品清洗干净，后在-40℃冷冻干燥机冷冻干燥，将干燥后的样品研磨成粉后备用。

5.如权利要求1所述的富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述样品溶液的制备包括：称取干燥后的样品0.2g于离心管中，加入含有20mg链霉蛋白酶E的20mmol/LTris-HCl缓冲液，置于超声清洗器中37℃水浴超声60min后，10000r/min下离心20min，收集上清液过0.45μm滤膜后备用。

6.如权利要求1所述富硒茶树中硒形态测定方法，其特征在于，所述液相色谱原子荧光联用仪分析参考条件具体包括：

(1)液相色谱分离条件

流动相：称取5.28g磷酸氢二铵溶于1000mL水中，用甲酸调pH至6.0，抽滤并超声脱气10min，备用；色谱柱：阴离子交换柱Hamilton PRP X100；流速：1.0mL/min；进样体积：100μL；

(2)原子荧光仪器条件

主电流：80mA；辅灯电流：40mA；载气流速：600mL/min；负高压：400V；屏蔽气：800mL/min；原子化器高度：8.0mm。