[发明专利]一种提高重组蛋白表达量的方法

说明书

本发明涉及一种提高重组蛋白表达量的方法，该方法包括如下步骤：将编码SNARE家族蛋白的基因转入用于表达重组蛋白的细胞中；使SNARE家族蛋白瞬时或稳定表达；所述重组蛋白不为所述SNARE家族蛋白。本发明提供的方法通过在宿主细胞中过表达SNARE家族蛋白，从而显著提升重组蛋白产量。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种提高重组蛋白表达量的方法。

背景技术

重组蛋白工业生产的常用哺乳动物作为宿主细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是最常用的宿主细胞。尽管CHO细胞已成功地用作制造宿主细胞系统超过30年，但这些细胞系在生长速度和重组蛋白生产能力方面仍然受到一定限制。改善宿主细胞的性能，提高宿主细胞的重组蛋白表达量，一直都是重组蛋白生产领域关注的重点。通过生物分子学方法改造细胞系是常用的提高宿主细胞重组蛋白表达量的方法，现阶段应用于CHO细胞的细胞系改造方法包括：敲除、过表达特定基因以及使用非编码RNA等。这些特定基因涉及蛋白合成、细胞代谢、分泌以及细胞周期等各个细胞通路。

目前，亟待提供一种提高重组蛋白表达量的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，利用SNARE家族蛋白改造用于表达重组蛋白的细胞，改善其性能。

第一方面，本发明提供一种提高重组蛋白表达量的方法，所述方法包括如下步骤：将编码SNARE家族蛋白的基因转入用于表达重组蛋白的细胞中，进行瞬时或稳定表达；所述重组蛋白不为所述SNARE家族蛋白。

本发明提供的方法通过在宿主细胞中过表达SNARE家族蛋白，从而提升重组蛋白产量。

在一些实施方式中，所述SNARE家族蛋白包括Sec22b蛋白(SEC22 homolog B,vesicle trafficking protein),Bet1蛋白(Bet1 golgi vesicular membranetrafficking protein)和/或Stx5蛋白(syntaxin 5)。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Sec22b蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Bet1蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Stx5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Sec22b蛋白和编码Bet1蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Sec22b蛋白和编码Stx5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Bet1蛋白和编码Stx5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Bet1蛋白和编码Stx5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码Sec22b蛋白、编码Bet1蛋白和编码Stx5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述基因经过了密码子优化。

在一些实施方式中，所述载体中还插入了蛋白标签，如Flag标签、Halo标签、SNAP标签、His-tag标签等。

在一些实施方式中，所述载体为真核细胞表达载体。作为本发明的优选方案，所述载体为pcDNA3.1载体，如pcDNA3.1 Hygro(+)载体。