[发明专利]一种动态准确检测原代肿瘤细胞免疫特征的方法

说明书

本发明属于医药技术领域，具体为一种原代肿瘤细胞免疫特征的检测方法。本发明的原代肿瘤细胞免疫特征的体外检测方法，包括：培养不同患者来源的原代肿瘤细胞，建立膀胱癌原代肿瘤细胞库，通过高通量流式检测平台对原代细胞IFN‑γ刺激前后PD‑L1的表达水平进行检测，并将原代细胞与重组人PD‑1‑Fc嵌合蛋白进行孵育，检测原代细胞对PD‑1蛋白的结合能力；结合上述一系列指标，实现对相应患者的免疫治疗效果的预测。本发明利用便捷的原代细胞培养方法及高通量流式检测平台，通过对原代肿瘤细胞进行动态、快速、准确、定量的免疫相关蛋白表达水平及体外结合能力的检测，实现体外平台对癌症患者的个性化预后评估。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种原代肿瘤细胞免疫特征检测方法，并以此为基础进行癌症患者免疫治疗效果预测。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，发病以男性为主,其发病率在男性泌尿生殖系统恶性肿瘤中居首位，且近年来有逐年增加的趋势。与许多其他癌症不同，在过去的三十年中，膀胱癌的生存率并没有显著提高。尽管有标准的治疗方案，非肌层浸润性患者的5年复发率仍高达60～70％，进展率高达45％。对肌层浸润性患者而言，临床化疗的响应率低于20％，患者预后相对较差，在5年随访中死亡风险约为65％。

如今，随着肿瘤免疫治疗的快速发展，针对免疫治疗的研究有了极大进步，在实际临床治疗中的应用比例有了明显的提高。截止目前已经有五种被FDA批准用于治疗膀胱癌的免疫检查点抑制剂药物，包括Pembrolizumab，Atezolizumab，Nivolumab，Avelumab和Durvalumab，分别为PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，用于治疗局部晚期或转移性膀胱癌。其中Pembrolizumab(PD-1抑制剂)最近刚被FDA批准可用于治疗对BCG治疗无应答的非肌层浸润性膀胱癌。虽然免疫检查点抑制剂的效果令人振奋，然而目前临床上相当一部分的晚期膀胱癌患者仍然无法从中受益。临床中发现，晚期膀胱癌患者免疫检查点抑制剂药物的应答率平均仅为15～30％。此外，免疫检查点药物价格昂贵，同时存在引起自身免疫性疾病等风险。因此，提前预测患者是否对免疫检查点抑制剂类药物有响应，从而制定更好的治疗方案变得尤为重要。

由于免疫治疗应用于临床的时间有限，目前对于免疫治疗对不同患者的治疗效果评估主要是用药1-2个疗程后通过常规CT、PET-CT、组织切片免疫组化等检查方法进行评判。但由于免疫治疗引起的免疫相关不良事件(immune-related adverse events,irAE)对患者的病情进展及后期治疗均有极大影响，且肿瘤进展速度快，治疗方案的提前确定极为重要，这种用药后评估方法还远远不够。目前，免疫组化(immunohistochemistry，IHC)检测PD-L1在肿瘤细胞或肿瘤浸润免疫细胞上的表达，已成为免疫检查点抑制剂治疗中应用最广泛的生物标志物。早期研究显示，通过IHC检测的肿瘤组织PD-L1表达水平与PD-1/PD-L1抑制剂的治疗疗效相关，然而，这种相关性并不呈现在所有的临床免疫治疗试验中。除了肿瘤组织PD-L1的表达水平外，研究比较热门的预测性指标还包括肿瘤突变负荷(tumormutation burden，TMB)以及肿瘤浸润CD8⁺T细胞的比例等。虽然这些指标在回顾性分析中被认为与患者的预后有一定的相关性，但就预测性标记物而言，它们的作用仍然有限。有一些体外的模型也在尝试应用于免疫治疗的响应预测，比如复杂的基因分析和计算机模拟平台，以及PDX模型和类器官的建立等，这些模型都只是在尝试和摸索的阶段，也都有其应用的局限性存在。