[发明专利]一种快速检测新冠病毒IgM抗体的方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种快速检测新冠病毒IgM抗体的方法和试剂盒。本发明的快速检测新冠病毒IgM抗体的方法，包括：S1：将重组新冠病毒S1‑RBD蛋白包被于固相载体上；S2：向包被有重组新冠病毒S1‑RBD蛋白的固相载体中加入待检样本，孵育、洗涤；S3：向洗涤后的固相载体中加入酶标二抗，孵育、洗涤，随后显色。本发明的方法和试剂盒解决了现有检测方法操作时间长、出结果慢等技术问题，大大缩短了检测时间，同时保证了对新冠病毒抗体检测的准确性和稳定性。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其是涉及一种快速检测新冠病毒IgM抗体的方法和试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)，简称“新冠肺炎”，世界卫生组织命名为“2019冠状病毒病”，是2019新型冠状病毒感染导致的肺炎。根据现有病例资料，新冠肺炎以发热、干咳、乏力等为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状；重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。

酶联免疫吸附试验(ELISA)又称酶联免疫法，是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。常规的ELISA技术通常先将一抗血清加入包被有抗原的酶联板，置于37℃下孵育2小时；随后采用PBS洗涤酶联板后加入酶标二抗，置于37℃下孵育1小时；再先后加入A液和B液进行显色，加入终止液后在酶标仪上读数，操作总耗时约3小时。

目前，在新冠肺炎诊断方面尚无检测新冠病毒抗体的酶联免疫试剂盒面市。同时，常规ELISA实验方法存在检测操作时间过长、检测结果得出较慢等问题和缺陷，从而不利于疫情期间对新冠病毒抗体的大规模应急血清学检测。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测新冠病毒IgM抗体的方法和试剂盒，其解决了现有检测方法操作时间长、出结果慢等技术问题，大大缩短了检测时间，同时保证了对新冠病毒抗体检测的准确性和稳定性。

本发明提供的一种快速检测新冠病毒IgM抗体的方法，包括：

S1：将重组新冠病毒S1-RBD蛋白包被于固相载体上；

S2：向包被有重组新冠病毒S1-RBD蛋白的固相载体中加入待检样本，孵育、洗涤；

S3：向洗涤后的固相载体中加入酶标二抗，孵育、洗涤，随后显色。

本发明的方法采用重组新冠病毒S1-RBD蛋白包被固相载体，有利于快速地得出检测结果。

本发明对重组新冠病毒S1-RBD蛋白的制备方法没有特殊要求，即利用基因工程技术获取真核表达系统表达的重组新型冠状病毒S1-RBD蛋白；具体地，重组新型冠状病毒S1-RBD蛋白的制备方法：采用PCR扩增的方法克隆新冠病毒S1-RBD蛋白的基因,通过核酸内切酶酶切和DNA连接酶连接的方法获得可在哺乳动物细胞(HEK293)中表达重组蛋白的真核表达载体，将此真核表达载体转染至HEK293细胞，该真核表达系统HEK293细胞即可分泌表达重组新冠病毒S1-RBD蛋白。

本发明对所采用的固相载体不作严格限制，例如可以采用酶联板等常规固相载体。

在本发明中，所述重组新冠病毒S1-RBD蛋白的包被浓度为3-5μg/mL，优选为4μg/mL。通过优化重组新冠病毒S1-RBD蛋白的包被浓度，进一步保证了对新冠病毒抗体检测的准确性和稳定性。

本发明对待检样本不作严格限制，待检样本例如可以为稀释血浆、稀释血清等。特别是，稀释血浆或稀释血清的稀释倍数可以为50-150倍，优选为100倍。该稀释倍数有利于缩短ELISA时长，从而达到省时、提高工作效率等目的。