[发明专利]一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，制备方法和应用

说明书

本发明涉及细胞培养领域，具体讲，涉及一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，制备方法和应用。本发明的用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡为脐带华通胶源间充质干细胞分泌的。本发明制备得到的来自脐带华通胶源间充质干细胞的细胞外纳米囊泡具有抗炎、再生和免疫调节功能，促进内皮细胞再生与微环境修复、抑制平滑肌细胞增殖，抗纤维组织增生，促炎症型巨噬细胞向抗炎症的M2转化，保护靶病变内膜完整，实现了血运重建与预防支架内再狭窄及新生动脉粥样硬化和血栓形成的同步化。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体讲，涉及一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，制备方法和应用。

背景技术

冠心病是威胁人类生命的第一杀手。经皮穿刺冠状动脉介入治疗(PCI)是冠心病治疗的最重要手段。40多年来PCI术器材不断进展，作为PCI核心技术成分-支架在不断更新。尽管如此，支架置入后再发新冠状动脉粥样硬化(NA)及晚期血栓一直影响PCI术后中远期疗效。

证据表明，即使应用最新型药物洗脱支架，光学相干断层扫描(OCT)发现仍有27.4％～50％支架内新动脉粥样硬化形成。临床上甚至1/4患者需重复处理支架内新斑块形成所致再狭窄。现硏究发现，二代药物洗脱支架，如佐他莫司洗脱支架、依维莫司洗脱支架等雷帕霉素衍生物药物洗脱支架，或新型无聚合物涂层药物洗脱(西罗莫司、紫杉醇)支架，所产生的抑制内皮细胞、平滑肌细胞增殖的药理效应，却触发了促动脉粥样硬化发病核心机制，即氧化应激产物ROS增多，M1型炎症巨噬细胞激活，大量氧化低密度脂蛋白内膜下堆积及被巨噬细胞吞噬。显著降低细胞骨架衔接蛋白Nck，mTOR、rictor表达和mTORC2的形成，最终导致形成特色的支架内新动脉粥样斑块(Neoatherosclerosis，NA)，其特征为相对较薄的纤维帽和大量的黄色脂质积聚的粥样易损斑块。因此，晚期NA伴内膜破裂和血栓形成是晚期支架血栓形成的最常见机制，也与ST段抬高心肌梗死的高频率发生有关。因此，目前临床迫切需要革新于现有药物洗脱支架的负载物。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡。

本发明的第二发明目的在于提供该细胞外纳米囊泡在用于制备冠状动脉药物负载支架中的应用。

本发明的第三发明目的在于一种冠状动脉药物负载支架。

本发明的第四发明目的在于提供该细胞外纳米囊泡的制备方法。

为了完成本发明的发明目的，采用的技术方案为：

本发明提出一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，所述细胞外纳米囊泡为脐带华通胶源间充质干细胞分泌的。

可选的，所述细胞外纳米囊泡的制剂为冻干粉。

可选的，所述冻干粉中还含有赋形剂，赋形剂优选甘露醇、山梨醇、葡萄糖、乳糖中的至少一种，细胞外纳米囊泡与赋形剂的重量比为1：50～5000，优选1：100～1000。

可选的，所述细胞外纳米囊泡为采用采用含有细胞松弛素B的培养基对所述脐带华通胶源间充质干细胞进行处理、然后分离得到。

可选的，所述细胞松弛素B的浓度为5～20μg/mL，优选10μg/mL；优选的，所述培养基选自DMEM培养基。

可选的，所述分离选自膜亲和分离法分离；优选采用exoEasy旋转柱进行分离。

本发明还涉及该细胞外纳米囊泡在用于制备冠状动脉药物负载支架中的应用，优选的，所述细胞外纳米囊泡完全替代化学药物负载与所述支架内。

本发明还涉及一种冠状动脉药物负载支架，采用上述细胞外纳米囊泡负载于支架的纳米微孔道中，所述支架选自钴铬合金或铂铬合金。

本发明还涉及该细胞外纳米囊泡的制备方法，至少包括以下步骤：