[发明专利]一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于负载冠脉支架的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述细胞外纳米囊泡为脐带华通胶源间充质干细胞分泌的。

2.根据权利要求1所述的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述细胞外纳米囊泡的制剂为冻干粉。

3.根据权利要求2所述的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述冻干粉中还含有赋形剂，赋形剂优选甘露醇、山梨醇、葡萄糖、乳糖中的至少一种，细胞外纳米囊泡与赋形剂的重量比为1：50～5000，优选1：100～1000。

4.根据权利要求1所述的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述细胞外纳米囊泡为采用采用含有细胞松弛素B的培养基对所述脐带华通胶源间充质干细胞进行处理、然后分离得到。

5.根据权利要求4所述的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述细胞松弛素B的浓度为5～20μg/mL，优选10μg/mL；优选的，所述培养基选自DMEM培养基。

6.根据权利要求4所述的细胞外纳米囊泡，其特征在于，所述分离选自膜亲和分离法分离；优选采用exoEasy旋转柱进行分离。

7.如权利要求1～6任一项所述的细胞外纳米囊泡在用于制备冠状动脉药物负载支架中的应用，优选的，所述细胞外纳米囊泡完全替代化学药物负载与所述支架内。

8.一种冠状动脉药物负载支架，采用如权利要求1～6任一项所述的细胞外纳米囊泡负载于支架的纳米微孔道中，所述支架选自钴铬合金或铂铬合金。

9.如权利要求1～6任一项所述细胞外纳米囊泡的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

S1、获得脐带华通胶源间充质干细胞；

S2、采用含有细胞松弛素B的培养基对所述脐带华通胶源间充质干细胞进行处理；所述处理温度优选为37℃，时间优选为20～40分钟，

S3、分离所述细胞外纳米囊泡。

10.根据权利要求9所述得制备方法，其特征在于，所述脐带华通胶源间充质干细胞通过以下方法培养得到：

S11、取华通胶组织，剪碎后在平皿中进行组织贴壁培养；

S12、待细胞铺满瓶底80％后，清洗，制成细胞悬液，接种到3D水凝胶中，于37℃、体积分数为5％的二氧化碳、饱和湿度条件下扩增培养；

S13、待细胞融合80％时用水凝胶酶消化、洗涤，传代，取第二、三代细胞在5％低氧细胞培养箱中培养10～18小时。