[发明专利]一种免疫细胞培养方法

说明书

本发明公开了一种免疫细胞培养方法，包括如下步骤：S1：准备工作，S2：样品稀释，S3：梯度离心，S4：收集白膜层，S5：清洗，S6：清洗，S7：接种，S8：加滋养细胞，S9：起始培养，S10：观察记录，S11：冻存。此免疫细胞培养方法避免了以往人工手动操作对细胞培养液吹打费时费力且吹打效果差的情况，提高了吹打效率，通过设置了第一离心机构和第二离心机构能够实现对细胞培养液的离心处理，装置通过一次性在吹打混合机构外部设置四个第一离心机构和四个第二离心机构，多工位操作，能够一次性进行大量免疫细胞的培养，效率高，便于推广。

技术领域

本发明涉及免疫细胞培养技术领域，具体为一种免疫细胞培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞是机体重要的免疫细胞,不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生,能够识别靶细胞、杀伤介质，免疫细胞在医学上有着重要的作用，因此需要对免疫细胞进行培养。

现有免疫细胞培养中需要对培养液体进行人工吹打混合，并在操作过程中需要多次离心处理，处理中人工操作过程复杂，培养成本较高，且现有免疫细胞培养中一次性培养的细胞较少，培养效率较为低下，为此，我们提出一种免疫细胞培养方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免疫细胞培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种免疫细胞培养方法，包括如下步骤：

S1：准备工作，培养液及淋巴细胞分离液复温至室温；

S2：样品稀释，将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释，通过吹打混合机构充分吹打混匀，转移至50ml离心管中；

S3：梯度离心，于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液，20℃，800g条件下通过第一离心机构离心20min；

S4：收集白膜层，离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中，每管加生理盐水至50ml，转速1500rpm通过第二离心机构离心6min；

S5：清洗，倾弃上清，用手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散，加生理盐水重悬，将各离心管中的细胞悬液合并混匀，总体积30ml；

S6：清洗，将所需体积的细胞悬液再次离心，转速1500rpm，离心6min，倾弃剩余上清，手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散；

S7：接种，用15ml完全培养基重悬，接种至培养瓶中；

S8：加滋养细胞，复苏滋养细胞，加生理盐水至40ml重悬，取样计细胞活率，转速1500rpm离心5min，用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中；

S9：起始培养，加入1.5ml浓度5％的自体血浆、30mlNK完全培养基、1.5ml自体血浆、滋养细胞，设置温度37℃在CO2培养箱中开始培养；

S10：观察记录，肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录。

S11：冻存；

所述步骤S2中的吹打混合机构的底部设置有底板，且吹打混合机构固定安装在底板的顶部中心，所述吹打混合机构包括处理箱、箱盖、进料口、空心管、缓冲板和吹打管，所述底板的顶部中心固定安装有固定架，且底板顶部位于固定架内部固定安装有处理箱，所述处理箱的顶部安装有箱盖，且箱盖顶部的一端设置有进料口，所述箱盖的顶部中心固定安装有空心管，且空心管的端部伸入处理箱内部，所述空心管位于处理箱内部的一端固定连接有缓冲板，且缓冲板整体成圆形结构，所述缓冲板内设置有空腔，所述空心管与缓冲板内部连通，所述缓冲板的底部等距固定连接有吹打管，且吹打管均与缓冲板内部连通，所述吹打管的端部成锥形结构，且吹打管的外侧安装有单向气阀；