[发明专利]一种免疫细胞培养方法

权利要求书

1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：准备工作，培养液及淋巴细胞分离液复温至室温；

S2：样品稀释，将分离血浆后的下层红细胞加入等体积生理盐水稀释，通过吹打混合机构充分吹打混匀，转移至50ml离心管中；

S3：梯度离心，于每管装有淋巴细胞分离液的50ml离心管中缓缓加入准备好的稀释血液，20℃，800g条件下通过第一离心机构离心20min；

S4：收集白膜层，离心后用移液机构的25ml移液管吸取中间白膜层于50ml离心管中，每管加生理盐水至50ml，转速1500rpm通过第二离心机构离心6min；

S5：清洗，倾弃上清，用手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散，加生理盐水重悬，将各离心管中的细胞悬液合并混匀，总体积30ml ；

S6：清洗，将所需体积的细胞悬液再次离心，转速1500rpm，离心6min，倾弃剩余上清，手指适度弹敲离心管底部，直至细胞沉淀松散；

S7：接种，用15ml完全培养基重悬，接种至培养瓶中；

S8：加滋养细胞，复苏滋养细胞，加生理盐水至40ml重悬，取样计细胞活率，转速1500rpm离心5min，用15ml完全培养基重悬加入步骤七所述培养瓶中；

S9：起始培养，加入1.5ml浓度5%的自体血浆、30mlNK完全培养基，设置温度37℃在 CO2培养箱中开始培养；

S10：观察记录，肉眼及显微镜观察并进行相关数据检测和记录；

S11：冻存；

所述S2中的吹打混合机构（2）的底部设置有底板（1），且吹打混合机构（2）固定安装在底板（1）的顶部中心，所述吹打混合机构（2）包括处理箱（6）、箱盖（7）、进料口（8）、空心管（9）、缓冲板（10）和吹打管（11），所述底板（1）的顶部中心固定安装有固定架（27），且底板（1）顶部位于固定架（27）内部固定安装有处理箱（6），所述处理箱（6）的顶部安装有箱盖（7），且箱盖（7）顶部的一端设置有进料口（8），所述箱盖（7）的顶部中心固定安装有空心管（9），且空心管（9）的端部伸入处理箱（6）内部，所述空心管（9）位于处理箱（6）内部的一端固定连接有缓冲板（10），且缓冲板（10）整体成圆形结构，所述缓冲板（10）内设置有空腔，所述空心管（9）与缓冲板（10）内部连通，所述缓冲板（10）的底部等距固定连接有吹打管（11），且吹打管（11）均与缓冲板（10）内部连通，所述吹打管（11）的端部成锥形结构，且吹打管（11）的外侧安装有单向气阀；

所述S3中的第一离心机构（3）和步骤四中的第二离心机构（4）均固定安装在底板（1）顶部，所述第一离心机构（3）位于吹打混合机构（2）和第二离心机构（4）之间，所述步骤四中的移液机构（5）固定安装在底板（1）顶部，且移液机构（5）位于第一离心机构（3）和第二离心机构（4）之间；

所述空心管（9）位于箱盖（7）外部的一端固定连接有固定盒（13），且固定盒（13）的整体成圆板形结构，所述空心管（9）与固定盒（13）内部连通，所述固定盒（13）侧壁固定连接有安装盒（18），且安装盒（18）外侧等距开设有三个弧形槽（19），所述安装盒（18）内部通过弧形槽（19）与外部连通，所述固定盒（13）远离固定盒（13）的一侧内部固定连接有支撑弹簧（20），且支撑弹簧（20）的端部固定连接有封堵板（17），所述封堵板（17）配合滑动连接在安装盒（18）内部，所述固定盒（13）位于安装盒（18）的一侧开设有连通口（16），且固定盒（13）通过连通口（16）与安装盒（18）内部连通，所述封堵板（17）位于连通口（16）的一侧固定连接有滑动杆（15），且滑动杆（15）的端部穿过固定盒（13），所述箱盖（7）的顶部滑动连接有立板（14），所述滑动杆（15）的端部与立板（14）固定连接，所述滑动杆（15）外侧位于立板（14）和固定盒（13）之间套设有伸缩弹簧（22）；

所述箱盖（7）的顶部开设有水平方向的滑槽（12），所述立板（14）的底部设置有限位块，且限位块配合滑动连接在滑槽（12）内部，所述立板（14）通过设置在其上的限位块滑动连接在箱盖（7）顶部，所述箱盖（7）顶部位于立板（14）的侧边对称固定连接有固定板（26），且两个固定板（26）之间的顶端通过转轴转动连接有偏心轮（24），所述偏心轮（24）与立板（14）接触，所述固定板（26）顶端固定安装有转动电机（25），且转动电机（25）的输出轴端部穿过固定板（26）与偏心轮（24）固定连接；

所述第一离心机构（3）和第二离心机构（4）均包括固定座（28）、转台（29）、固定槽（30）、放置架（31）和离心管（32），所述底板（1）顶部位于固定架（27）外部等距固定安装有四个固定座（28），且固定座（28）内转动连接有转台（29），所述转台（29）的顶部等距开设有四个固定槽（30），且四个固定槽（30）内转动连接有放置架（31），所述放置架（31）内卡接有离心管（32），所述固定架（27）的顶部固定安装有水泵（42），且水泵（42）的进液端安装有连接管（43），且连接管（43）的端部与处理箱（6）的底端连接，所述水泵（42）的出水端固定安装有排料管（44），且排料管（44）位于离心管（32）的正上方；

所述转台（29）的底部转动连接有外齿圈（39），所述放置架（31）的底部均转动连接有传动齿轮（38），且四个传动齿轮（38）均与外齿圈（39）啮合连接，所述转台（29）底部固定安装有伺服电机（40），且伺服电机（40）的输出轴端部固定安装有驱动齿轮（41），所述驱动齿轮（41）与外齿圈（39）啮合连接。