[发明专利]一种用于检测副溶血性弧菌DNA的反应体系、试剂盒及其应用

权利要求书

1. 一种用于检测副溶血性弧菌DNA的反应体系，其特征在于，所述反应体系为SHERLOCK反应体系，其包括用于扩增目的核酸片段的特异性引物对和对应的crRNA；所述目的核酸片段为tlh基因、tdh基因、toxR基因和trh基因；所述特异性引物对包括如SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2所示的tlh基因引物序列、如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的tdh基因引物序列、如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的toxR基因引物序列、如SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11所示的trh基因引物序列；所述crRNA序列用于结合扩增后的所述目的核酸片段转录的ssRNA，所述crRNA为4条，分别为如SEQ ID NO：3所示的tlh基因crRNA、SEQ ID NO6所示的tdh基因crRNA、SEQ ID NO：9所示的toxR基因crRNA、SEQ ID NO12所示的trh基因crRNA。

2.根据权利要求1所述的反应体系，其特征在于，所述的反应体系中各引物对的浓度为10~20μM，所述crRNA的浓度为22.5~30nM。

3.根据权利要求1所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包含有荧光标记分子，所述荧光标记分子的浓度为250~300nM。

4. 根据权利要求1所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包含有 ReactionBuffer，Basic E-mix，Core Reaction Mix，纯化的LwCas13a蛋白，RNase抑制剂，T7 RNA 聚合酶，NTP Mixture，dNTP Mixture和Mg²⁺。

5.一种用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1~4中任一项所述的用于检测副溶血性弧菌的反应体系。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂和阴性对照。

7.一种非诊断目的的检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）使用核酸提取试剂提取待检样品中的核酸；

（2）以步骤（1）提取的核酸为模板，采用如权利要求1～4中任一项所述的反应体系进行SHERLOCK反应，反应时间为30~90min、反应温度为37～42℃，反应结束后分析检测结果。

8.权利要求1~4中任一项所述的用于检测副溶血性弧菌的反应体系在制备用于检测副溶血性弧菌的试剂中的应用。