[发明专利]一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒、检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括由一条非荧光标记探针、两条正反向扩增引物、5’-3’外切酶活性缺失的DNA聚合酶、荧光染料、dNTP混合液以及PCR缓冲液所组成的系统；

其中：所述非荧光标记探针为3’末端经过基团修饰封闭从而失去延伸能力的非荧光标记探针。

2.根据权利要求1所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述非荧光标记探针可以为3’末端经过基团修饰封闭的DNA探针或RNA探针中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述非荧光标记探针可以为寡核苷酸探针、双探针、蝎形探针、分子信标探针、孪生探针中的任意一种。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述非荧光标记探针的长度为20～40bp。

5.根据权利要求1所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述聚合酶为klenow酶、pfu DNA聚合酶以及Vent DNA聚合酶中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为核酸特异性的饱和染料，其激发波长为440-470nm，发射波长为470-520nm。

7.根据权利要求6所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述包括荧光染料为LC Green、Syto9或者Eva Green中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述两条正反向扩增引物的浓度比例不对称，反向引物与正向引物的浓度比为(10～20)：1。

9.一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(S.1)样品核酸提取纯化；

(S.2)配制权利要求1～8中任意一项所述的基因突变检测试剂盒；

(S.3)将样品加入到配置好的基因突变检测试剂盒中；

(S.4)荧光PCR扩增；

(S.5)通过高分辨熔解曲线进行分析。

10.一种利用权利要求1～8中任意一项所述基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒在体外诊断中的应用。