[发明专利]一种高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶在酶催化法中生产S-腺苷-L-甲硫氨酸及与氟化酶的双酶级联反应中的应用，其特征在于，所述转移酶为一种Co²⁺依赖型的酶，其DNA序列如SEQ ID NO .1所示，所述转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO .2所示，所述转移酶由星海链霉菌中提取的甲硫氨酸腺苷转移酶的基因序列metK与表达载体pET-32a(+)进行双酶切后连接得到；

所述转移酶的制备方法具体步骤如下：

1)提取星海链霉菌的基因组；

2)以步骤1)中的基因组为DNA模板，采用PCR扩增技术，得到星海链霉菌中的甲硫氨酸腺苷转移酶的基因序列即metK目的片段；

3)将步骤2)中的metK目的片段与表达载体pET-32a(+)进行双酶切后连接，构建重组质粒，所述双酶切的位点分别为NdeI和XhoI；

4)采用热激化法将步骤3)中的重组质粒转化到大肠杆菌BL21的感受态细胞中，并经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达，得到高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶即SxMAT；

5)通过对步骤4)中的高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶的包涵体部分进行变性后复性的方式，得到高纯度的高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶；

所述转移酶的最适反应温度为55℃，最适反应pH值为8.5，且所述转移酶催化的产物的光学纯度(ee)90％，产率为80％，所述转移酶的热稳定性范围为25-55℃，pH稳定范围为8-10.5，反应液中添加金属离子Co²⁺能提高转移酶活性；

所述转移酶与氟化酶联用，构建体外双酶级联反应，直接催化底物无机氟离子和ATP以及L-Met，生成5’-氟化脱氧腺苷。