[发明专利]一种混合精斑提取工艺

说明书

本发明涉及一种混合精斑提取工艺。所述混合精斑提取工艺包括：对检材进行一次裂解，收集一次沉淀，对一次沉淀进行二次裂解，收集二次沉淀，对二次沉淀进行三次裂解，收集上清液，获得含有男性DNA的溶液。本发明的混合精斑提取工艺，对检材进行两次裂解消化女性成分，能够缩短裂解处理周期并高效消化女性成分，且避免残留的女性成分对后续分析男性DNA的影响。

技术领域

本发明属于DNA提取技术领域，涉及一种混合精斑提取工艺。

背景技术

强奸案中的女性阴道或内裤、床单上遗留的精斑是最常见的混合检材，经过消化女性成分，可得到单一的男性分型。目前，常应用Chelex-100法获得精子DNA，但操作复杂，耗时长，效率低，且DNA提取量少，不利于案件的快速侦破，因此，有大量研究尝试对现有提取方法进行改进。

赵铁军(赵铁军.混合精斑DNA三种提取方法的比较[J].法医学杂志,2004,020(004):237-237,239.)对Chelex-100法进行改进，提出Chelex-100二次处理法和Chelex-100+有机法，Chelex-100二次处理法为在Chelex-100法基础上增加一次Chelex-100消化过程；Chelex-100+有机法为使用酚、氯仿和异戊醇混合液对Chelex-100法获得的上清液进行抽提，再使用冰乙醇氯化钠溶液进行处理。上述两种方法均能提高DNA的提取量和纯度，但仍存在操作复杂，耗时长以及效率低的问题。

李红霞(李红霞,陈晓晖.精斑检材的3种提取方法比较[J].中国法医学杂志,2007,22(005):323-324.)等对Chelex-100法进行优化，使用磁珠法对Chelex-100法获得的上清液进行抽提，能够显著提高DNA的提取量并缩短操作时间，但操作复杂，且实验人员水平和环境变化都将影响分离效果，不利于推广使用。

综上所述，提供一种操作简单、耗时短且成本低的混合精斑提取工艺，对于法医学技术领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种混合精斑提取工艺，所述混合精斑提取工艺能够高效分离检材中的女性成分和男性成分，获得高纯度的男性DNA，且能在全自动移液工作站中自动化进行并可同时处理多个检材，操作简单，耗时短，效率高。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种混合精斑提取工艺，所述混合精斑提取工艺包括：

对检材进行一次裂解，收集一次沉淀，对一次沉淀进行二次裂解处理，收集二次沉淀，对二次沉淀进行三次裂解，收集上清液，获得含有男性DNA的溶液。

本发明的混合精斑提取工艺中，首先对检材进行两次裂解消化女性成分，得到仅含有男性细胞的检材，能够缩短裂解处理周期并高效消化女性成分，避免残留的女性成分对后续分析男性DNA的影响。

优选地，所述混合精斑提取工艺在全自动移液工作站中进行。

本发明中，在全自动移液工作站基础上开发混合精斑提取工艺，从而实现在全自动移液工作站中自动化进行混合精斑提取，可同时处理多个检材，降低了操作难度，缩短了提取时间，提高了处理效率以及检出纯目标男性的成功率，有利于快速侦破案件。

优选地，所述混合精斑提取工艺还包括分别对一次沉淀和二次沉淀进行清洗的步骤。

优选地，所述清洗的清洗液包括Tris-Cl、氯化钠和乙二胺四乙酸。

优选地，所述Tris-Cl在所述清洗液中的浓度为90～110mM，包括但不限于91mM、92mM、93mM、94mM、100mM、102mM、104mM、106mM或108mM。