[发明专利]一种他克莫司软膏有关物质测定的前处理方法

说明书

本发明公开了一种他克莫司软膏有关物质测定的前处理方法，其是在以正己烷‑丙酮混合溶液作为提取溶剂的基础上，采用低温冻融处理，以有效去除油性软膏基质对有关物质检测的干扰，从而实现目标物质的有效测定，其专属性好，杂质回收率符合要求。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种他克莫司软膏有关物质测定的前处理方法。

背景技术

他克莫司（tacrolimus），也称为FK-506或FR-900506，是1984年日本Fujisawa制药公司从土壤放线菌中分离出来的一种具有大环内酯结构的新型强力免疫抑制剂。他克莫司的主要药理作用在于能有效抑制T细胞激活，在肝移植抗排斥方面和治疗特应性皮炎方面具有其它药物无可比拟的优势。近期研究发现他克莫司软膏可以有效治疗特应性皮炎、银屑病、脂溢性皮炎等，且其适应症仍在不断扩展。目前，他克莫司软膏适于因潜在危险而不宜使用传统疗法，或对传统疗法反应不充分、或无法耐受传统疗法的中到重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗。

他克莫司软膏的基质组成中包含白凡士林、蜂蜡、石蜡、液体石蜡等成分，这些油脂性基质辅料均为多组份混合物，由于国内各厂家制备工艺和质量控制标准不同，其所含组分情况也各不相同，即使同一厂家生产的不同批次的辅料其性质也存在较大差异，这往往会使其有关物质测定结果存在巨大偏差。对杂质的控制是药品研发领域一个非常重要的环节，直接关系到药品的稳定性、有效性及安全性，采用常规的溶剂提取或固相萃取柱提取等方法无法保证将不同批次油脂性基质与他克莫司及其相关物质有效分离出来。发明专利CN 109828038A中提出采用正己烷-乙酸乙酯混合溶液进行提取，并采用固相萃取柱进行分离。但有文献报道部分品牌的乙酸乙酯会产生不明杂质，从而影响分析结果。因此，开发一种有效的他克莫司软膏样品的前处理方法，以去除油脂性基质中辅料的干扰，保证他克莫司及其相关物质的有效提取，有助于提高分析方法的重复性、准确性及适用性，并可为制剂的质量控制提供良好保证。

发明内容

本发明的目的在于提供一种他克莫司软膏有关物质测定的前处理方法，其可有效去除油性软膏基质对有关物质检测的干扰，保证他克莫司及其相关物质的有效提取，提高分析方法的重复性、准确性及适用性。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种他克莫司软膏有关物质测定的前处理方法，其包括如下步骤：

（1）样品提取：称取适量他克莫司软膏于玻璃离心管中，加入正己烷-丙酮混合溶液，剧烈振荡至混悬完全后低温静置，再以4000r/min离心5min，取上清液，重复提取1次后，合并上清液；

（2）固相萃取柱分离：将步骤（1）所得上清液全部转移入固相萃取柱，使他克莫司及其相关物质完全吸附于固相萃取柱后，再用正己烷-乙酸乙酯混合溶液进行淋洗，之后先用乙酸乙酯洗脱，待乙酸乙酯洗脱完成后再加入乙腈进行洗脱，用梨形瓶分别收集乙酸乙酯和乙腈的洗脱液，并将所有洗脱液合并，旋转蒸干，再在所得残留物中加入少量正己烷-正丁基氯-乙腈混合溶液，涡旋使残留物溶解后，所得溶液经微孔滤膜过滤后用于HPLC定性测定。

步骤（1）中所用他克莫司软膏与正己烷-丙酮混合溶液的质量体积比为1g:5mL；所述正己烷-丙酮混合溶液中正己烷与丙酮的体积比为5:1-15:1，优选为10:1。

步骤（1）中所述低温静置的温度为-50~-5℃，优选为-20℃，时间为20-40min，优选为30min。

步骤（2）所用正己烷-乙酸乙酯混合溶液与上清液的体积比为3:1；所述正己烷-乙酸乙酯混合溶液中正己烷与乙酸乙酯的体积比为1:1-10:1，优选为2:1。

步骤（2）中用于洗脱的乙酸乙酯及乙腈与上清液的体积比均为1:2。。

步骤（2）所述正己烷-正丁基氯-乙腈混合溶液中正己烷、正丁基氯与乙腈的体积比为1:1:1。

本发明的显著优势在于：