[发明专利]一种用于检测12种儿童消化道感染相关细菌的引物探针组合及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测12种儿童消化道感染相关细菌的引物探针组合，其特征在于，包括：空肠弯曲杆菌的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示；艰难梭菌上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物序列如SEQID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示；鼠伤寒沙门菌上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ ID NO.8所示，探针序列如SEQ ID NO.9所示；副溶血性弧菌上游引物序列如SEQ ID NO.10所示，下游引物序列如SEQ ID NO.11所示，探针序列如SEQ IDNO.12所示；小肠结肠炎耶尔森菌上游引物序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物序列如SEQID NO.14所示，探针序列如SEQ ID NO.15所示；黏附性大肠埃希菌上游引物序列如SEQ IDNO.16所示，下游引物序列如SEQ ID NO.17所示，探针序列如SEQ ID NO.18所示；产毒性大肠埃希菌上游引物序列如SEQ ID NO.19所示，下游引物序列如SEQ ID NO.20所示，探针序列如SEQ ID NO.21所示；致病性大肠埃希菌上游引物序列如SEQ ID NO.22所示，下游引物序列如SEQ ID NO.23所示，探针序列如SEQ ID NO.24所示；出血性大肠埃希菌上游引物序列如SEQ ID NO.25所示，下游引物序列如SEQ ID NO.26所示，探针序列如SEQ ID NO.27所示；侵袭性大肠埃希菌上游引物序列如SEQ ID NO.28所示，下游引物序列如SEQ ID NO.29所示，探针序列如SEQ ID NO.30所示；志贺菌上游引物序列如SEQ ID NO.31所示，下游引物序列如SEQ ID NO.32所示，探针序列如SEQ ID NO.33所示；霍乱弧菌上游引物序列如SEQID NO.34所示，下游引物序列如SEQ ID NO.35所示，探针序列如SEQ ID NO.36所示；管家基因上游引物序列如SEQ ID NO.37所示，下游引物序列如SEQ ID NO.38所示，探针序列如SEQID NO.39所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测12种儿童消化道感染相关细菌的引物探针组合，其特征在于：所述空肠弯曲杆菌探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；所述艰难梭菌探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述鼠伤寒沙门菌探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述副溶血性弧菌探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述小肠结肠炎耶尔森菌探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述黏附性大肠埃希菌探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；所述产毒性大肠埃希菌探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述致病性大肠埃希菌探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述出血性大肠埃希菌探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；所述侵袭性大肠埃希菌探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述志贺菌探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述霍乱弧菌探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；管家基因探针的5’端标记有CY5发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2。

3.一种用于检测12种儿童消化道感染相关细菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合、病原菌标志物的标准品、逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl₂、DEPC水和Taq酶，其中，所述的试剂盒的PCR扩增条件为：55℃逆转录15min；95℃预变性30s；95℃变性10s；60℃退火30s；40个循环。

4.根据权利要求3所述的用于检测12种儿童消化道感染相关细菌的试剂盒，其特征在于：所述引物探针组合中的引物在扩增体系中的终浓度为100-1000nM；所述引物探针组合中的TaqMan探针在扩增体系中的终浓度为50-500nM。