[发明专利]一种检测新型微载体在细胞中的残留的方法

说明书

本发明公开了一种检测新型微载体在细胞中的残留的方法。该方法包括检测样品中所述微载体的组成成分或所述组成成分的水解产物，确定所述微载体在细胞中的残留量；所述样品为采用所述微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解所述微载体后所收获的细胞。该方法能够定性或者定量检测三维微载体培养后，裂解微载体收获细胞中微载体残留量，可以应用该方法对于收获的细胞进行微载体残留检测，从而保障了细胞制剂的安全性。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体涉及一种检测新型微载体在细胞中的残留的方法。

背景技术

细胞的大规模工业化培养技术对于生物制药、疫苗生产、细胞治疗等生物行业至关重要。其中，间充质干细胞具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，具有较强的免疫调节作用，能促进造血恢复功能和修复损伤或病变的组织器官。它在骨、软骨、肌肉、神经等组织工程方面具有广阔的临床应用前景，因此越来越受到市场的的欢迎。目前间充质干细胞市场需求极大，然而普通体外二维培养间充质干细胞难以满足连续化大规模生产的各项标准和要求。因此要满足以后如此庞大的间充质干细胞市场需求，必须依赖微载体细胞培养技术。虽然这门新兴的细胞培养技术是未来医学、制药等领域的热门应用技术，但是目前还存在一些需要优化和改进的方面。其中，间充质干细胞在微载体上悬浮培养，并收获细胞后，细胞中微载体残留的检测就是一个需要优化和提高精确性的程序。

目前市面上微载体大多以糖类或高分子的实心球或者纳米纤维片装为主，收集细胞时，多使用胰酶等细胞消化液使细胞从微载体上脱落，然后清洗，过滤或者梯度离心的方式使细胞和未降解的微载体分离，进而收获细胞。目前这种方式收获细胞，弊端有四，其一，细胞消化液反应速度较快，在大规模细胞生产过程中难以准确控制反应时间，可能损伤细胞生理功能；其二，此方法无法将培养的细胞从微载体上完全消化下来，导致细胞回收率低；其三，由于微载体无法降解，因此细胞脱离微载体后，需要额外的梯度离心或者过滤的方法将微载体去除以获得细胞，增加了整个生产过程的成本和过程的复杂性；其四微载体颗粒若无法得到有效去除，其残留将导致后续细胞制品注射体内将引起血管堵塞或者异物排斥等安全性问题。

北京华龛生物科技有限公司根据市场需求，研发出可降解的三维微载体聚集体(CN201910079680.3，商品名为微载片)。北京华龛生物根据微载体的生化特性专门研发的裂解液可将微载体完全裂解成液态状，使细胞能够高效地从微载体上脱落并通过简单离心即可实现完全收获。该裂解液只针对微载体进行裂解，不伤害细胞，因此可实现温和高效收获细胞的目的。但是目前还缺乏定量/定性检测通过使用此类微载体(或相同成分微载体)培养和收获的细胞中微载体残留的方法，来帮助评估使用微载体方法生产细胞制剂用于细胞治疗的安全性。因此，开发出新的微载体残留的检测方法对应用微载体悬浮培养细胞非常重要。

发明内容

本发明提供一种新的微载体残留检测方法，要求检测者对使用微载体(要求含有羟脯氨酸且可降解的微载体)培养后新鲜收获的细胞，快速进行微载体残留定量或定性检测，从而保障用于细胞治疗的细胞制剂在本项检测内容的安全性。本发明可以通过使用市售试剂盒和新的测试方法，在使用微载体悬浮培养细胞并使用华龛微载体裂解液收获细胞后，可以应用该方法对于收获的细胞进行微载体残留检测，从而保障了细胞制剂在本项内容的安全性。

本发明提供了一种检测微载体在细胞中的残留的方法，包括检测样品中所述微载体的组成成分或所述组成成分的水解产物，确定所述微载体在细胞中的残留量；所述样品为采用所述微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解所述微载体后所收获的细胞。

可选地，根据上述的方法，所述微载体的组成成分包括胶原蛋白、变性胶原蛋白和/或明胶。

可选地，根据上述的方法，所述微载体为北京华龛生物科技有限公司的3D微载片(以下简称为“微载片”)。

可选地，根据上述的方法，所述样品通过如下步骤制备：

(1)向包含培养细胞的所述微载体的培养体系中加入所述微载体裂解液，获得单细胞悬液；