[发明专利]一种检测新型微载体在细胞中的残留的方法

权利要求书

1.一种检测微载体在细胞中的残留的方法，其特征在于：包括检测样品中所述微载体的组成成分或所述组成成分的水解产物，确定所述微载体在细胞中的残留量；所述样品为采用所述微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解所述微载体后所收获的细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述微载体的组成成分包括胶原蛋白、变性胶原蛋白和/或明胶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述微载体为北京华龛生物科技有限公司的3D微载片。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述样品通过如下步骤制备：

(1)向包含培养细胞的所述微载体的培养体系中加入所述微载体裂解液，获得单细胞悬液；

(2)离心所述单细胞悬液，获得沉淀；

(3)采用清洗液清洗所述沉淀；

(4)采用所述清洗液将清洗后的沉淀混悬得到单细胞悬液；

(5)静置步骤(5)所得到的所述单细胞悬液；

(6)离心所述步骤(5)静置后的所述单细胞悬液，获得沉淀；

(7)重复步骤(3)-(6)2-5次后，获得的所述沉淀作为样品。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述清洗液为PBS或生理盐水，所述PBS为pH 7.0-7.2，溶质为1.0581mM KH₂PO₄、5.6002mM Na₂HPO₄、154.0041mM NaCl，溶剂为水的溶液；所述生理盐水为溶质为0.9g/LNaCl，溶剂为水的溶液。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述沉淀中的细胞数量与所述清洗液体积比为(0.5-5.0)×10⁷个∶1-10ml。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述组成成分的水解产物为羟脯氨酸，所述方法包括水解所述样品获得游离的羟脯氨酸，采用氯胺T氧化所述游离的羟脯氨酸获得氧化产物，采用二甲氨基苯甲醛与所述氧化产物反应获得红色化合物，测量所述红色化合物在560nm处的吸光值。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

所述水解所述样品获得游离的羟脯氨酸包括在所述样品中加入提取液，110-135℃，水解3-4h以获得所述游离的羟脯氨酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述提取液为6mol/L盐酸水溶液，所述样品的细胞数量与所述提取液的体积比为(0.5-5)×10⁷个∶0.4-4ml。

10.根据权利要求所述1-9任一项所述的方法，其特征在于：所述微载体裂解液为北京华龛生物科技有限公司的3DDigest微载体裂解液，货号R001-500。