[发明专利]一种检测新型微载体裂解液在细胞中的残留的方法

说明书

本发明公开了一种检测新型微载体裂解液在细胞中的残留的方法。该方法包括检测样品中的所述微载体裂解液的组成成分，确定所述微载体裂解液在细胞中的残留量；所述样品为采用微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解微载体后所收获的细胞。该方法能够定性或者定量检测可降解三维微载体培养后，裂解微载体收获细胞中微载体裂解液残留量。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体涉及一种检测新型微载体裂解液在细胞中的残留的方法。

背景技术

近年来，细胞治疗研发如火如荼。细胞治疗是利用在体外操作所获得的异体或自体的活细胞，重新回输到体内，让细胞对受损组织进行修复或者杀死病变组织(如肿瘤)。目前细胞治疗主要分为免疫细胞治疗和干细胞治疗。据新药研发监测数据库(CPM)显示，截止目前，中国干细胞治疗研究项目占全球约10％，免疫细胞治疗临床研究占全球约1/3，已经成为仅次于美国的第二大市场。预计至2030年，仅美国FDA就有望批准40至60种细胞和基因疗法。同时，随着科研投入的持续增加和技术实力的不断加强，在中国开展的细胞与基因治疗的临床研究正在逐年增加，每年新增数量仅次于美国。中国已成为世界上细胞治疗临床研究最活跃的地区之一。

细胞治疗将细胞当作药物对患者进行实施，因此细胞的大规模、高质量的生产是保证细胞治疗效果的重要技术。传统的二维细胞培养方法，有着诸多的不便利因素，例如所需空间大，产量低，不易控制等，这使得大规模培养细胞受到制约。借鉴生物制药、疫苗生产等较为成熟的生物行业的细胞培养技术，采用微载体细胞培养技术是目前公认的最有发展前途的一种培养模式。虽然这门新兴的细胞培养技术是未来医学、制药等领域的热门应用技术，但是目前对于应用在细胞治疗领域还存在一些需要优化和改进的方面。

传统的微载体所培养的细胞主要用于收集细胞的产物，如疫苗、蛋白和病毒生产。然而使用传统微载体生产细胞治疗所需的细胞存在着培养后较难将微载体上的细胞有效地收获下来的问题。传统微载体使用领域中，在分离细胞时，需用EDTA和胰蛋白酶溶液将细胞从微载体表面消化，使细胞脱离微载体表面。细胞脱离微载体后，可用自然沉降法，或通过筛网将微载体过滤去除后，方可离心滤过液，获得细胞。由于需要进一步的分离步骤，增加了整个生产过程的成本和过程的复杂性，且长时间对细胞进行消化会造成细胞受损是常规知识，导致无法获得高品质的细胞制品用于治疗。而且微载体颗粒若无法得到有效去除，其残留将导致后续细胞制品注射体内引起安全性问题。

为了解决这个问题，北京华龛生物科技有限公司研发的可降解三维微载体聚集体(CN201910079680.3，商品名为微载片)可以使用微载体裂解液针对微载体进行裂解，使微载体从固态溶解为液态，从而将载体上的细胞释放到溶液中，通过离心的方式，将溶液与细胞分离，从而获得细胞。由于裂解液裂解的是微载体而非对细胞进行消化，因此对细胞温和，保持细胞活性并保留细胞自身分泌的蛋白，从而解决了从微载体上收获细胞后，需要再去除微载体颗粒的繁琐步骤及其安全隐患。虽然解决了传统微载体不利于细胞制品的生产的问题、但由于引入了微载体裂解液，为保障细胞制剂临床应用中的安全性，需要对细胞制剂中微载体裂解液残留进行检测。但是目前还缺乏有效的检测收获细胞中微载体裂解液残留的方法。所以，开发出新的检测微载体裂解液残留的方法对应用微载体培养细胞的临床应用非常重要。

发明内容

本发明提供一种新的微载体裂解液残留检测方法，要求检测者对使用华龛生物的微载体聚集体，3D 微载片(以下均简称为微载片)，培养后新鲜收获的细胞，快速进行微载体裂解液成分胶原蛋白酶活性的定量或定性检测，从而保障用于临床细胞治疗的细胞制剂在本项检测内容的安全性。本发明可以通过使用市售试剂盒和新的测试方法，在使用微载体悬浮培养细胞，并使用华龛生物的3DDigest微载体裂解液收获细胞后，可以应用该方法对于收获后的细胞进行检测，从而保障了细胞制剂在本项内容的安全性。

本发明提供了一种检测3DDigest微载体裂解液在细胞中的残留的方法，所述方法包括检测样品中的所述微载体裂解液的组成成分，确定所述微载体裂解液在细胞中的残留量；所述样品为采用微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解微载片后所收获的细胞。