[发明专利]一种检测新型微载体裂解液在细胞中的残留的方法

权利要求书

1.一种检测微载体裂解液在细胞中的残留的方法，其特征在于：所述方法包括检测样品中的所述微载体裂解液的组成成分，确定所述微载体裂解液在细胞中的残留量；所述样品为采用微载体培养细胞后，使用微载体裂解液裂解微载体后所收获的细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述微载体的组成成分包括胶原蛋白、变性胶原蛋白和/或明胶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述微载体为北京华龛生物科技有限公司的3D微载片。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述样品通过如下步骤制备：

(1)用微载体培养细胞，向包含培养细胞和所述微载体的培养体系中加入所述微载体裂解液，获得单细胞悬液；

(2)离心所述单细胞悬液，获得沉淀；

(3)采用清洗液清洗所述沉淀；

(4)采用所述清洗液将清洗后的沉淀混悬得到单细胞悬液；

(5)静置步骤(4)得到的所述单细胞悬液；

(6)离心所述步骤(5)静置后的所述单细胞悬液，获得沉淀；

(7)重复步骤(3)-(6)1-5次后，将获得的沉淀重悬在所述清洗液中作为样品。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中所述沉淀中的细胞数量与所述清洗液的体积比(0.5-5.0)×10⁷个：1-10ml。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述清洗液为PBS或生理盐水或HBSS，所述PBS为pH 7.0-7.2，溶质为1.0581mM KH₂PO₄、5.6002mM Na₂HPO₄、154.0041mM NaCl，溶剂为水的溶液；所述生理盐水为溶质为0.9g/L NaCl，溶剂为水的溶液；所述HBSS为pH7.0-7.4，溶质为8g/L NaCl、0.4g/L KCl、0.2g/L MgS0₄·7H₂O、0.14g/L CaCl₂、0.06g/LNa₂HPO₄·2H₂0、0.06g/L KH₂PO₄、1g/L D-Glucose、0.35g/L NaHCO₃。

7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于：

所述步骤(1)包括向所述培养体系中加入细胞冻存液，降温，液氮保存1周，复溶，离心去除所述细胞冻存液，获得冻存后的培养体系，向所述冻存后的培养体系中加入所述微载体裂解液，获得单细胞悬液；或

所述步骤(7)包括将所述沉淀重悬在所述细胞冻存液中，降温，液氮保存1周，复溶，离心去除所述冻存液，获得冻存后的细胞，将所述冻存后的细胞重悬在所述清洗液中作为样品。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于：所述微载体裂解液包括胶原蛋白酶。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：所述微载体裂解液为北京华龛生物科技有限公司的3DDigest微载体裂解液，货号为R001-500。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于：所述微载体裂解液的组成成分为胶原蛋白酶；

具体地，所述检测样品中的所述微载体裂解液的组成成分包括采用所述胶原蛋白酶消化荧光素标记的DQ明胶共轭物以显示荧光，根据所述荧光确定所述样品中微载体裂解液的残留量，或

所述检测样品中的所述微载体裂解液的组成成分包括采用所述胶原蛋白酶催化FALGPA的比色法，根据OD_345nm吸光度的下降速率确定所述样品中的胶原蛋白酶含量，根据所述胶原蛋白酶含量确定所述样品中微载体裂解液的残留量。