[发明专利]一种从植物甾醇制备脱氧胆酸的方法

权利要求书

1.保藏编号为CCTCC NO：M 2020987的诱变菌种在制备脱氧胆酸中的应用。

2.保藏编号为CCTCC NO：M 2020987的诱变菌种联合赭曲霉菌Aspergillus ochraceusATCC 18500菌种在制备脱氧胆酸中的应用。

3.一种从植物甾醇制备脱氧胆酸的方法，包括以下步骤：

A)将保藏编号为CCTCC NO：M 2020987的诱变菌种经培养后接种至第一转化培养基，对豆甾醇进行第一发酵转化，得到化合物1；

B)将赭曲霉菌Aspergillus ochraceus ATCC 18500菌种经第二斜面培养、第二种子培养后接种至第二转化培养基，对化合物1进行第二发酵转化，得到化合物2；

C)化合物2在乙酸酐和浓硫酸的作用下反应生成化合物3；

D)化合物3在催化剂作用下与空气反应生成化合物4；所述催化剂为N-羟基邻苯二甲酰亚胺、过氧化苯甲酰化和四水合醋酸钴；

E)化合物4在催化剂的作用下与氢气反应生成化合物5；

F)化合物5溶于四氢呋喃和水中，与硼氢化钠反应生成式Ⅱ所示脱氧胆酸；

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一发酵转化方法为：将保藏编号为CCTCC NO：M 2020987的诱变菌种经一级种子培养和二级种子培养后加入转化培养基中，接种量10％～40％，温度20-30℃，转速200～600rpm，空气流量0.1～0.4Nm³/h，压力0.01～0.1MPa，转化时间为72～180h。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述一级种子培养和二级种子培养的培养基配方为：酵母膏粉10～20g/L，葡萄糖10～20g/L,硝酸钠2～6g/L，磷酸氢二铵0.1～1.0g/L，pH为7.5；

所述转化培养基配方为：豆甾醇10～40g/L，大豆油10～20g/L，玉米浆30～80g/L，硝酸钠2～6g/L，磷酸氢二铵0.1～1.0g/L，调pH＝8.0。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，第一发酵转化后，进行后处理，得到化合物1；

所述后处理具体为：

调节体系pH值为5.0-6.0，加热搅拌后，静止分层；取油层用甲醇进行提取，浓缩除去溶剂后，用乙酸乙酯回流打浆，冷却析出固体后过滤；滤液浓缩除去溶剂，用氯仿和水，在pH12-13的条件下，常温搅拌、静置分层；取水相调节pH至1.0，静置分层；取分层后得到的油状物，为化合物1。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二发酵转化的条件为：接种量5％～10％，室温，转速200～300rpm，空气流量0.2～0.4Nm³/h，压力0.01～0.1MPa，转化时间为72-120h；

所述第二斜面培养的培养基为：土豆块100～300g/L，葡萄糖10～30g/L,琼脂10～20g/L,调pH为6.5；

所述第二种子培养的培养基为：玉米浆5～20g/L，葡萄糖10～40g/L，调pH值为7.2±0.2；

所述第二转化培养基为：玉米浆5～20g/L，葡萄糖10～40g/L，调pH值为7.2±0.2；

所述第二发酵转化后，进行后处理，得到化合物2；

所述后处理为：

第二发酵转化结束后，升温至80℃灭活，降至常温调pH＝3.0左右，抽滤；滤饼用二氯甲烷冲洗，收集滤液，浓缩干溶剂后加水搅拌均匀然后过滤，得到化合物2。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤E)中的催化剂为钯碳。