[发明专利]一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白及应用

说明书

本发明涉及一种嵌合蛋白，具体涉及一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白及应用。所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白包含第一多肽和第二多肽，其中，第一多肽和第二多肽相互嵌合，第一多肽为EGF‑CTA2‑TAT蛋白，第二多肽包含霍乱毒素的CTB亚基序列和胃泌素多肽序列以及连接肽序列。该嵌合蛋白具有生物活性，并能大量、快速生产，能够用于通过口服灌胃的途径诱导胰腺再生，拓展了诱导胰腺再生的新型药物剂型。

技术领域

本发明涉及一种嵌合蛋白，具体涉及一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白及应用。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种全球性疾病，分为1型糖尿病和2型糖尿病，近年的研究表明胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足是2型糖尿病特征性的病理生理改变，二者相互作用，最终导致2型糖尿病的发生。不仅如此，胰岛素抵抗还参与了糖尿病慢性并发症如心血管并发症、糖尿病肾病等的发生、发展，是联系糖尿病、高血压、高脂血症、冠心病的一个重要枢纽。因此针对2型糖尿病的发病机制，采用有效的药物减轻胰岛素抵抗、增加胰岛素分泌对于2型糖尿病及其并发症的治疗具有重要的意义。现有2型糖尿病治疗药物主要包括双胍类药物、促胰岛素分泌药物以及胰岛素增敏剂，这类药物可单独使用或配合胰岛素联合进行治疗。不管是1型糖尿病还是2型糖尿病，都伴随着胰岛细胞的损伤，而目前使用的口服降糖药物无法解决胰岛β细胞凋亡的问题，并且在治疗时存在严重副反应。

研究表明，表皮生长因子(EGF)联合胃泌素也能增加来自成人胰腺组织的胰岛中的β细胞质量。表皮生长因子联合胃泌素增加培养的人胰岛中β细胞的数量，这种作用在从培养基中去除胃泌素、表皮生长因子后可持续4周。胰岛细胞始终存在于人类胰岛中，β细胞数量的增加归因于表皮生长因子刺激导管细胞增殖和导管细胞PDX-1表达和分化中胃泌素依赖性增加介导的β细胞新生激活。在将人胰岛移植到糖尿病小鼠体内后，表皮生长因子联合胃泌素也增加了功能性的细胞数量。表皮生长因子联合胃泌素诱导胰腺导管细胞β细胞新生的能力对治疗1型和2型糖尿病的新方法具有潜在意义。

霍乱毒素是由霍乱弧菌产生的肠毒素，由1个A单位(CTA)和5个B单位(CTB)形成的多聚体连接而成。CTA为毒性亚单位，CTB为无毒的受体结合亚单位，可以和所有有核细胞膜上的神经节苷脂(GM1)受体结合。CTB作为免疫佐剂，已用于重组B亚单位/菌体霍乱疫苗(上海联合赛尔生物工程有限公司)，使用剂量为每剂1mg，证明是安全的。CTB也可作为有效的蛋白药物呈递载体，Arati等人(Arati Limaye,Vijay Koya,Mohtashem Samsam,and HenryDaniell.Receptor-mediatedoral delivery of a bioencapsulated green fluorescentprotein expressed in transgenic chloroplasts into the mouse circulatorysystem.FASEB J.2006,May；20(7):959-961.)将CTB和绿色荧光蛋白GFP在烟草叶绿体中融合表达，用这种烟草喂食Balb/c小鼠，作者发现融合蛋白结合到了细胞膜表面的GM1受体上，GFP进入了淋巴循环，进一步进入血液循环系统。

表皮生长因子联合胃泌素诱导胰腺再生注射剂型以及体外诱导细胞分化后移殖已在临床实验中应用。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白。

本发明的另一目的在于提供上述基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：