[发明专利]一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白及应用

权利要求书

1.一种基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白，其特征在于由第一多肽和第二多肽组成，其中，第一多肽和第二多肽相互嵌合，第一多肽为EGF-CTA2-TAT蛋白，第二多肽包含霍乱毒素的CTB亚基序列和胃泌素多肽序列以及连接肽序列；

所述的第二多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述的第一多肽的核苷酸序列为SEQ ID NO. 6所示。

2.根据权利要求1所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白，其特征在于：

编码第二多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.根据权利要求1所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白，其特征在于：

所述的第二多肽，通过如下方法制备得到：

将末端包含弗林蛋白酶切位点RRRR序列的连接肽和末端包含弗林蛋白酶切位点RRRR序列的胃泌素GAS序列顺次连接并基因合成，得到Linker-GAS，将Linker-GAS酶切后插入到pET28a-CTB载体中，得到重组载体pET28a-CTB-Linker-GAS，再将该组载体pET28a-CTB-Linker-GAS导入宿主菌中进行蛋白表达并纯化，得到第二多肽。

4.根据权利要求3所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白，其特征在于：

所述宿主菌为大肠杆菌BL21、DH5α或Rosetta。

5.权利要求1~4任一项所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）将第一多肽与第二多肽在pH=2.0～2.5、温度为23℃～25℃的条件下变性15min～30min；

（2）变性后再在pH=8.3～8.5、温度为4℃的条件下复性1h～48h，得到基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白。

6.根据权利要求5所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白的制备方法，其特征在于：

所述的第一多肽与第二多肽的摩尔比为1：1。

7.一种药物组合物，其特征在于包含权利要求1~4任一项所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白和辅料。

8.权利要求1~4任一项所述的基于霍乱毒素多聚体结构的诱导胰腺再生的口服嵌合蛋白或权利要求7所述的药物组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。