[发明专利]一种检测柞蚕肠球菌的巢式PCR引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测柞蚕肠球菌的巢式PCR引物，其特征在于，所述巢式PCR引物的核苷酸序列如下：

外侧引物：

EperDDRPβF：5’-CTCAAGGTCTTCCTCGTGTCCA-3’，EperDDRPβR：5’-ACTTTACGAAGCATTTGGCGAAC-3’；

内侧引物：

EperDDRPβU：5’-ATCTTTGAAGCACGTAATCCGAA-3’，EperDDRPβL：5’-GCCGATTTCTACCCCTTGCAT-3’。

2.一种检测柞蚕肠球菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的巢式PCR引物。

3.一种非疾病诊断目的的柞蚕肠球菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样品的DNA作为模板，使用权利要求1所述的外侧引物EperDDRPβF和EperDDRPβR进行第一轮PCR扩增，以第一轮PCR扩增产物作为模板，使用权利要求1所述的内侧引物EperDDRPβU和EperDDRPβL进行第二轮PCR扩增，利用琼脂糖凝胶电泳检测第一轮PCR扩增产物和第二轮PCR扩增产物，若只有第二轮PCR扩增产物有1条电泳条带，或者第一轮PCR扩增产物和第二轮PCR扩增产物均有1条电泳条带，说明待测样品中含有柞蚕肠球菌。

4. 根据权利要求3所述的柞蚕肠球菌的检测方法，其特征在于，所述的第一轮PCR扩增，其PCR体系为50 μL，包括1 μL Taq酶、2.5 μL 2.5 mM dNTPs、5 μL 10×Buffer、1 μL10 μM EperDDRPβF、1 μL 10 μM EperDDRPβR、10 μL DNA模板，其余为无菌去离子水。

5. 根据权利要求3所述的柞蚕肠球菌的检测方法，其特征在于，所述的第二轮PCR扩增，其PCR体系为50 μL，包括1 μL Taq酶、2.5 μL 2.5 mM dNTPs、5 μL 10×Buffer、1 μL10 μM EperDDRPβU、1 μL 10 μM EperDDRPβL、1 μL 第一轮PCR扩增产物，其余为无菌去离子水。

6. 根据权利要求3、4或5所述的柞蚕肠球菌的检测方法，其特征在于，所述的第一轮PCR扩增和第二轮PCR扩增，其PCR扩增条件均为94℃预变性2 min；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，循环35次；72℃延伸7 min。

7.权利要求1所述的检测柞蚕肠球菌的巢式PCR引物或权利要求2所述的检测柞蚕肠球菌的试剂盒在非疾病诊断目的的检测柞蚕肠球菌中的应用。