[发明专利]一种应用斑马鱼鱼胚进行化妆品温和刺激性评价的方法

说明书

本发明涉及一种应用斑马鱼鱼胚进行化妆品温和刺激性评价的方法，属于化妆品评价技术领域。本发明所述方法将待测化妆品和20～72hpf的斑马鱼鱼胚混合，观察并统计鱼胚刺激情况，实现化妆品温和刺激性评价；所述观察的指标包括鱼胚摆尾和鱼胚死亡或凝结。本发明所述方法，以斑马鱼鱼胚为实验载体，斑马鱼鱼胚为透明状，利于观察；产卵量大，实验样本数大，可重复性高；能对外界刺激性做出快速反应。本发明使用斑马鱼鱼胚对化妆品的温和刺激性进行评价，可快速、科学、高通量的筛选实验样品，加快化妆品相关企业的研发进程。同时为化妆品相关企业和消费者挑选安全的化妆品原料和化妆品提供更多的评价选择。

技术领域

本发明涉及化妆品评价技术领域，具体涉及一种应用斑马鱼鱼胚进行化妆品温和刺激性评价的方法。

背景技术

化妆品温和刺激性对化妆品的配方研究、生产和市场推广具有重要意义，目前主要采用的方法包括兔眼实验、牛眼实验和鸡胚尿囊膜实验方法评价化妆品的温和刺激性。《鸡胚绒毛尿囊膜试验用于化妆品的体外眼刺激性评价》报道了采用鸡胚绒毛尿囊膜评价化妆品体外眼刺激性的评价方法。《TSHRH 011-2018化妆品眼刺激性测试鸡胚绒毛尿囊膜试验》中采用鸡胚绒毛尿囊膜试验和眼刺激性实验的方法。在上述方法中，兔眼刺激性实验，需要使用到新西兰兔做眼刺激性实验，但该方法试验周期长、成本高，动物试验结果与人体仍有一定的差异性，不太适应目前化妆品中动物替代实验的趋势和要求，且对动物有较大伤害，该方法受到越来越多的批评和谴责；牛眼角膜浊度实验使用的的是离体器官进行实验，利用离体牛眼角膜，将待测物直接与其接触，通过对牛角膜浑浊度和渗透性的测定及公式计算，对待测物的刺激性进行分类。该方法可用于评估化妆品是否有刺激性，而无法准确区分刺激性等级，且在大规模使用时原料的来源往往受到较大限制；鸡胚绒毛尿囊膜实验是利用鸡胚尿囊膜与眼结膜组织机构类似的特点，通过观察尿囊膜暴露于受试物质后血管的刺激反应(出血、血管溶解、凝血)进行评估。该实验周期往往较长，实验结果易受实验者主观因素影响，难以量化，实验结果判定假阳性或假阴性的情况较多(王北明，陈郁璇，钟敏贤.化妆品刺激性评价方法的研究进展[J].香料香精化妆品，2017，000(005):69-74)。目前并没有一种高效的化妆品温和刺激性评价的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种应用斑马鱼鱼胚进行化妆品温和刺激性评价的方法。本发明使用斑马鱼鱼胚对化妆品的温和刺激性进行评价，可快速、科学、高通量的筛选实验样品，加快化妆品相关企业的研发进程。同时为化妆品相关企业和消费者挑选安全的化妆品原料和化妆品提供更多的评价选择。

本发明提供了一种应用斑马鱼鱼胚进行化妆品温和刺激性评价的方法，包括以下步骤：

将待测化妆品和20～72hpf的斑马鱼鱼胚混合，观察并统计鱼胚刺激情况，实现化妆品温和刺激性评价；以斑马鱼系统养殖水或蒸馏水或PBS为空白对照，以十二烷基硫酸钠或脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠或氢氧化钠为阳性对照；所述观察的指标包括鱼胚摆尾和鱼胚死亡或者凝结；空白对照组观察鱼胚应无死亡或者凝结；阳性对照组观察鱼胚应100％死亡或者凝结。

优选的是，所述斑马鱼鱼胚包括野生AB型斑马鱼鱼胚。

优选的是，所述观察的时间为0.5～10min。

优选的是，所述评价的方法包括：

当无鱼胚摆尾且无鱼胚凝结时，判定为无刺激性；当所述混合后0.5～10min，无鱼胚死亡或者凝结，或鱼胚死亡率和凝结率之和＜50％，但与空白对照组相比无显著性差异时判定为无刺激性；当所述混合后0.5～10min，鱼胚摆尾小于空白对照，且与空白对照相比无显著性差异，判定为无刺激性；

当所述混合后0.5～10min，鱼胚死亡率和凝结率之和＜50％，与空白对照组相比有显著性差异且当所述混合后0.5～10min，鱼胚摆尾小于空白对照，且与空白对照相比无显著性差异时判定为轻微刺激性；