[发明专利]用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒，包括试剂盒本体、盒盖、第一限位板、第二限位板、通孔、限位槽和试剂管，方法包括，步骤一，样品获取；步骤二，样品初处理；步骤三，样品分析；步骤四，记录分析；该发明安全、可靠，通过本发明，可以一次性地使用少量样本进行T、B淋巴细胞亚群及免疫功能检测，并获取到全套数据，不必再次测定其余类似的数据；运用该发明设计的方案，可以获得外周血中T淋巴细胞总数及CD4和CD8阳性淋巴的的数量及比例，同时获得B淋巴细胞总数及比列，实现一次性快速简便得到犬类伴侣动物外周血T、B淋巴细胞亚群全套免疫学检测数据的目的。

技术领域

本发明涉及免疫功能检测技术领域，具体为用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒及方法。

背景技术

流式细胞术是一种对细胞进行自动化分析和分选的仪器装置，它可以对细胞悬液中细胞形态、表面和内部多肽分子进行快速测定、记录和分析，进而获得细胞的生物化学参数，并可以根据不同的荧光标记分子用于鉴定或分选不同类型的细胞亚群；流式细胞日常应用过程中，对于制备完好的细胞悬液，用于流式细胞仪分析，仪器首先对细胞悬液中进入流动池中不同类型的细胞进行前向散射光和侧向散射光检测，其中FSC信号强度反映细胞颗粒的体积大小和活力，SSC信号强度反映细胞内部颗粒度和精细结构的变化；检测过程中，常利用FSC和SSC这两参数组合对不同群体的细胞类型进行区分，同时去除细胞碎片、死细胞及粘连体的干扰，通过FSC-SSC散点图gate出目标细胞进行分析；淋巴细胞根据其发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同，可分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞；而T淋巴细胞和B淋巴细胞是各种动物体内获得性免疫功能的主要参与细胞，同时衡量动物免疫功能、病原体感染治疗干预及预后的重要参考指标，根据其在体内数量或比值的改变反映不同的感染类型；目前各家宠物诊疗机构对伴侣动物免疫功能的检测主要依靠较粗浅的血常规，对动物的特异性免疫功能水平检测很难进行，主要是没有一套完整评估免疫功能的试剂盒及行之有效的统一化检测标准；目前仅依靠血常规等粗略手段进行动物免疫功能检测过于粗放，已不能满足针对不同类型免疫功能的精确诊断和分析要求；因此，随着爱宠人士日益增多，开发新一代伴犬类侣动物免疫功能检测方案已迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒，包括试剂盒本体、盒盖、第一限位板、第二限位板、通孔、限位槽和试剂管，所述试剂盒本体的顶端外壁上设置有盒盖，所述试剂盒本体的一侧内壁上固定连接有第一限位板，所述试剂盒本体的底端内壁上固定连接有第二限位板，所述第一限位板的一侧外壁上分布贯通开设有通孔，所述通孔的一侧内壁上插接有试剂管，且试剂管的一端插接于限位槽的一侧内壁上。

用于犬类伴侣动物TB淋巴细胞亚群及免疫功能的试剂盒的方法，包括以下步骤，步骤一，样品获取；步骤二，样品初处理；步骤三，样品分析；步骤四，记录分析；

其中上述步骤一中，取适量犬的血液样本，经过洗涤、离心处理后，获得犬的外周血作为检测样本；

其中上述步骤二中，样品初处理包括以下步骤：

1)将取得的犬外周血于肝素钠的抗凝管中进行抗凝处理；

2)取100μl的血液于流式管中，分别加入试剂盒本体中的CD45、CD5、CD4、CD8、CD21抗体，并孵育30分钟；

其中上述步骤三中，样品分析包括以下步骤；

1)加入2ml红细胞裂解液，旋涡震荡混匀并于室温避光裂解红细胞，进行离心处理，去除上清液，并用磷酸盐缓冲液洗涤一次；

2)加入500μl上样缓冲液，用流式细胞仪分析步骤二中得到的淋巴细胞，通过CD45表达情况分析粒细胞群体；