[发明专利]一种从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法

说明书

本发明公开了一种从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法，其特征是包括：制备纵条纹炭角菌上样液；对D101树脂进行预处理，将预处理后的D101树脂装柱，加入上样液动力学吸附；树脂对纵条纹炭角菌中环肽Xylastriamide A的动力学解吸附。采用本发明，经D101树脂纯化后的环肽Xylastriamide A成分纯度有了较大的提高，富集、纯化效果明显，操作简便，分离步骤少、有机溶剂用量少、时间短，富集纯化的环肽Xylastriamide A具有显著的抗肿瘤和杀线虫活性，适用于相关药物中。

技术领域

本发明属于有机化合物的分离纯化，涉及一种从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法，本发明富集纯化的环肽Xylastriamide A具有显著的抗肿瘤和杀线虫活性，适于作为中药活性成分用于药物中。

背景技术

纵条纹炭角菌(Xylaria striata Pat.1887)为子囊菌门(Ascomycota)炭角菌科(Xylariaceae)炭角菌属(Xylaria Hill ex Schrank)真菌，生长范围主要在腐朽树皮和活树根上。炭角菌属真菌具有很大的研究、药用、食用价值，如黑柄炭角菌(俗称乌灵参)具有除湿、镇静安神、造血以及提高机体免疫功能等功效，其养生效果极佳。纵条纹炭角菌作为一种被申请人发现的真菌，已经对该菌安全性及改善睡眠方面进行研究，并优化了该菌的子实体培养条件、检测了该菌的生物活性，发现其具有很好的抗肿瘤活性。现有技术中，雷传文2017年公开了“纵条纹炭角菌子实体化学成分及生物活性研究”，该文中公开了从纵条纹炭角菌中分离得到的一种新的式(Ⅰ)所示的环肽Xylastriamide A，作为一种新的环肽类物质，发现其具有显著的抗肿瘤活性，并且对秀丽隐杆线虫也有着一定的抗虫活性等。

现有技术中，环肽类化合物的分离方法一般是采用传统的分离方法，就是通过一系列的色谱技术进行纯化，从而获得单体物质，该法分离步骤多，效率低，会耗费大量的溶剂和时间，固相吸附严重，得率低。现有技术中，一般采用高效液相色谱(简称HPLC)来简单的判断化合物的纯度，将现有提取得到的纵条纹炭角菌上样液，用HPLC多次检测后，发现Xylastriamide A的峰面积占比平均为4.13％，即Xylastriamide A的纯度平均为4.13％。

本发明所述的环肽Xylastriamide A为白色针状细晶(该化合物可以在甲醇溶液内结晶)，分子式为C₄₅H₆₄N₆O₉，其化学结构式如下式(Ⅰ)所示：

目前，尚未见纵条纹炭角菌中环肽Xylastriamide A在大孔吸附树脂上的吸附-解吸方法的文献报道。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术中的不足，提供一种从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法。本发明通过对D101大孔树脂吸附动力学进行分析研究，获到一种成熟的工艺步骤和工艺参数，从而提供一种分离步骤少、有机溶剂用量少、时间短、得率较高的从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法。

本发明的内容是：一种从纵条纹炭角菌中富集纯化环肽Xylastriamide A的方法，其特征是包括下列步骤：

a、制备纵条纹炭角菌上样液：

取纵条纹炭角菌子实体，粉碎后过40目筛；按1g纵条纹炭角菌子实体加20mL体积百分比浓度为60～95％乙醇水溶液的比例，将纵条纹炭角菌子实体与体积百分比浓度为60～95％乙醇水溶液混合并在60～85℃温度下浸泡2h，过滤，固体物再经该浸泡过程处理1～4次，合并滤液；滤液经旋转蒸发浓缩至浸膏后，再将浸膏加入蒸馏水中溶解，制备成浓度为0.0010～0.0070g/mL的溶液，即为制得的纵条纹炭角菌上样液，备用；

b、树脂对纵条纹炭角菌中环肽Xylastriamide A的动力学吸附：