[发明专利]一种猪盖他病毒NSP1基因的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪盖他病毒NSP1基因的检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括特异性引物和荧光探针，特异性引物中的上游引物序列为5’-CCATCCTGGACGTGGGTAGT-3，下游引物序列为5’-TTTCGCCAGTTTTCGAGCGT-3；荧光探针序列为5′-FAM-ACCACACCTACCACTGCATCTGCCCCA-TAMRA-3′。

2.根据权利要求1所述的猪盖他病毒NSP1基因的检测试剂盒，其特征在于荧光探针标记的FAM为荧光报告基团，TAMRA为荧光淬灭基团。

3.根据权利要求1所述的猪盖他病毒NSP1基因的检测试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括Probe Qpcr MIX。

4.一种权利要求1所述猪盖他病毒NSP1基因的检测试剂盒的使用方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

1)提取样品GETV-NSP1基因的DNA或反转录得到cDNA，构建样品GETV-NSP1-pBM16克隆质粒作为模板；

2)将模板、Probe qPCR MIX、特异性引物、荧光探针和水配成PCR反应体系，进行PCR扩增反应；

3)以阳性标准品GETV-PBM16A为模板相同条件下进行PCR扩增反应，以标准品溶液拷贝浓度的对数值为横坐标、标准品Ct值为纵坐标绘制标准曲线；

4)当样品Ct值≤28.0且出现典型扩增曲线为检测阳性；

5)根据样品测得的Ct值，对照标准曲线，获得样品的拷贝浓度。

5.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于所述步骤2)或3)的PCR反应条件如下：95℃变性5分钟，95℃30秒、50℃20秒，进行40个循环扩增。

6.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于所述步骤2)或3)中PCR体系中特异性引物浓度为4umol/L，荧光探针浓度为6umol/L。

7.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于该方法的最低核酸检出量为8.8369×10¹copies/μL。