[发明专利]一种基于酶法合成烟酰胺单核苷酸的方法

权利要求书

1.一种基于酶法合成烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，以D-核糖、烟酰胺、ATP为底物，在核糖激酶、磷酸核糖变位酶及烟酰胺核糖激酶的偶联催化作用下，一锅法合成得到烟酰胺单核苷酸；所述的烟酰胺核糖激酶为人类来源的烟酰胺核糖激酶，其氨基酸序列为SEQID NO.3。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系中，所述的D-核糖浓度为20-120mM；烟酰胺浓度为20-120 mM；ATP浓度为20-150 mM。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，反应体系中，所述的D-核糖浓度为50-100mM；烟酰胺浓度为50-100 mM；ATP浓度为60-120 mM。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，反应体系中，所述的D-核糖浓度为50 mM；烟酰胺浓度为50 mM；ATP浓度为60 mM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系的反应温度为20-37℃；反应体系的pH为4.5-7.0；反应时间3-8 h。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，反应体系的反应温度为25-30℃；反应体系的pH为5.0-6.0；反应时间4-6 h。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，反应体系的反应温度为25℃；反应体系的pH为5.0；反应时间4 h。

8.根据权利要求1或5或6或7所述的方法，其特征在于，反应体系的缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris-Hcl缓冲液，其浓度为20-200 mM。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，反应体系的缓冲液为磷酸盐缓冲液，其浓度为50-100 mM。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，反应体系的缓冲液为磷酸盐缓冲液，其浓度为50 mM。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，向反应体系中添加Mg²⁺和Mn²⁺离子，反应中的Mg²⁺浓度为10-50 mM；反应中的Mn²⁺浓度为1-20 mM。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，向反应体系中添加Mg²⁺和Mn²⁺离子，反应中的Mg²⁺浓度为20-40 mM；反应中的Mn²⁺浓度为5-10 mM。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，向反应体系中添加Mg²⁺和Mn²⁺离子，反应中的Mg²⁺浓度为20 mM；反应中的Mn²⁺浓度为5 mM。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核糖激酶来源为酿酒酵母、植物乳杆菌和大肠杆菌中的至少一种；磷酸核糖变位酶来源为酿酒酵母、海栖热袍菌及大肠杆菌中的至少一种。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述的核糖激酶来源为酿酒酵母；磷酸核糖变位酶来源为海栖热袍菌。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述的酿酒酵母来源的核糖激酶氨基酸序列为SEQ ID NO.1；海栖热袍菌来源的磷酸核糖变位酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

17.根据权利要求14或15或16所述的方法，其特征在于，所述核糖激酶、磷酸核糖变位酶及烟酰胺核糖激酶的表达宿主为微生物。