[发明专利]磁珠法提取质粒DNA的方法及提取质粒DNA的试剂盒

说明书

本发明涉及一种提取质粒DNA的试剂盒，包括磁性分离介质和至少一种质粒提取试剂，其中所述磁性分离介质为粒径为50～1000nm的磁性纳米微球。本发明还提供了一种磁珠法提取质粒DNA的方法。本发明的方法利用磁性分离介质的超顺磁性实现磁性分离，省略离心步骤，这种方法快速简便,价格低廉，而且易于实现自动化。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是指一种核酸特别是质粒的纯化。更具体而言,本发明涉及磁性分离技术,为一种快速简便提纯质粒DNA的新方法。本发明还包括使用本方法能够纯化质粒DNA的试剂盒。

背景技术

质粒是细菌或霉菌等细胞中独立存在的一种环状小分子双链DNA，以超螺旋状态存在于宿主细胞中，其大小从1～200kb不等。各种质粒都是独立于细胞染色体外的稳定性遗传因子，通常情况下持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。质粒能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。然而它们又依赖于宿主编码的酶和蛋白质来进行复制和转录，如离开宿主细胞则不能存活(参见：孙树汉，基因工程原理与方法.北京：人民军医出版社，2001)。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的，它是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要工具。目前，基因工程中使用的载体主要是质粒，质粒DNA的提取和纯化是进行基因工程的重要前提，因此，高效快速地纯化质粒具有重要意义。

质粒DNA提取方法很多，均包含以下3个主要步骤：1)培养细菌使质粒扩增；2)收集与裂解细菌；3)分离和纯化质粒DNA。质粒纯化时首先遇到的是裂解细菌释放DNA问题。细胞裂解的方法很多，目前较常用的有碱裂解法(Birnborn and Dohly,Nucl.Acids Res.,7:1513-1523,1979)、煮沸法(Holms and Quigley,Anal.Biochem.,114:193-197,1981)、有机溶剂法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法等。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒(15kb)。去污剂裂解法则比较温和，一般用于分离大质粒(15kb)。有机溶剂法最常用的是酚/氯仿抽提法，此法可以有效地去除各种蛋白质污染，但是因为此法不使用盐类，所以容易产生内毒素污染，同时RNA和ssDNA也很难被去除。此外，用酚处理核酸易产生缺口核酸，从而影响核酸的稳定性。