[发明专利]磁珠法提取质粒DNA的方法及提取质粒DNA的试剂盒在审
| 申请号： | 202110119628.3 | 申请日： | 2021-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN112662665A | 公开（公告）日： | 2021-04-16 |
| 发明（设计）人： | 刘照关 | 申请（专利权）人： | 苏州为度生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 苏张林 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市工业园*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 磁珠法 提取 质粒 dna 方法 试剂盒 | ||
1.一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：包括磁性分离介质和至少一种质粒提取试剂，其中所述磁性分离介质为粒径为50～1000nm的磁性纳米微球。
2.根据权利要求1所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述质粒提取试剂包括细菌悬浮液R1、菌体裂解液R2和R3、吸附缓冲液R4、洗涤液R5和洗脱液R6。
3.根据权利要求2所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述细菌悬浮液R1的组成为：10mmol/L EDTA，50mmol/L Tris-HCl(pH为7.5)，30～50μg/mL RNase A。
4.根据权利要求2所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述菌体裂解液R2为0.4mol/L的NaOH溶液，菌体裂解液R3为2％的SDS溶液。
5.根据权利要求2所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述吸附缓冲液R4的组成为：2.5～4mol/L盐酸胍(pH为5.0)，200～300mmol/L氯化钠，15～50mmol/L醋酸钾，1～3％冰醋酸，12～18％异丙醇。
6.根据权利要求2所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液为70％乙醇。
7.根据权利要求2所述的一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗脱缓冲液的组成为：10mmol/L Tris-HCl、1mmol/L EDTA。
8.一种磁珠法提取质粒DNA的方法，其特征在于：使用权利要求1-7任一项所述的提取质粒DNA的试剂盒，并包括以下步骤，
(1)将含有质粒DNA的液体与所述磁性分离介质接触，使得质粒DNA吸附到所述磁性分离介质的外表面上；
(2)通过洗脱的方式将质粒DNA从所述磁性分离介质的表面洗脱，从而回收质粒DNA。
9.根据权利要求8所述的一种磁珠法提取质粒DNA的方法，其特征在于：所述方法具体为：
(1)取菌液1.5mL，室温下以12000rpm的转速离心30秒，然后弃上清液；
(2)向沉淀中加入细菌悬浮液R1，旋涡振荡使其混合均匀；
(3)将新鲜配制的菌体裂解液加入到步骤(2)得到的混合液中，上下颠倒试管至溶液呈澄清状；
(4)加入吸附缓冲液R4和磁性分离介质，上下颠倒试管5-10次，室温下放置5min以吸附质粒DNA；
(5)磁性分离回收DNA-介质复合物；
(6)加入洗涤液R5，洗涤上述收DNA-介质复合物两次；
(7)加入洗脱液R6，室温下放置3min以回收含有质粒DNA的洗脱缓冲液。
10.根据权利要求9所述的一种磁珠法提取质粒DNA的方法，其特征在于：所述菌体裂解液是由菌体裂解液R2和R3按1:1的比例混合得到的。
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