[发明专利]用于体外评价新型冠状病毒ADE效应的系统及其构建方法

说明书

本发明公开了用于体外评价新型冠状病毒ADE效应的系统及其构建方法，所述系统包括免疫球蛋IgG受体FcγR的表达细胞、和/或含新型冠状病毒抗体的溶液、和/或新型冠状病毒假病毒；其中，所述免疫球蛋IgG受体FcγR为FcγRIIA，即CD32A；新型冠状病毒抗体促进新型冠状病毒假病毒感染免疫球蛋IgG受体FcγRIIA(CD32A)的表达细胞；根据上述系统评价待测新型冠状病毒或新型冠状病毒抗体的ADE效应。本发明利用SARS‑CoV‑2假病毒和外源性表达CD32A的细胞，体外鉴定出新型冠状病毒抗体及抗血清的ADE活性，本发明实验证明基于外源性表达CD32A细胞的ADE评价体系相比于免疫细胞系具有更敏感、更可靠，是一种很有潜力的评价新型冠状病毒ADE效应的系统。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于体外评价新型冠状病毒ADE效应的系统及其构建方法。

背景技术

抗体依赖性感染增强（antibody-dependent enhancement，ADE）作用最早在登革病毒的感染中被发现，即不同血清型病毒的继往感染会加重疾病的进程，其机制为：继往感染所产生的弱结合能力的抗体可以通过结合病毒包膜蛋白，及同时结合免疫细胞表面的Fc受体，介导病毒对免疫细胞的感染增强。靶向登革病毒包膜蛋白PrM及E的抗体均有可能产生ADE作用。另外，ADE在HIV、流感、埃博拉病毒感染中均有报导。

在冠状病毒中，人们早已发现，猫传染性腹膜炎病毒感染或疫苗接种对再次感染均起到加重作用，证明ADE可能存在于冠状病毒感染中。SARS和MERS的疫苗研究显示，用全长S蛋白免疫动物可能诱导无保护作用的非中和性抗体，加重病毒感染时的病理变化，提示ADE在这两种冠状病毒感染及疾病加重中可能也起到一定作用，并给疫苗研发增加了复杂性和难度。在SARS-CoV中，S471-503、S604-625和S1164-1191可诱导中和抗体，有效防止非人灵长类动物感染。相反，肽S597-603通过表位序列依赖机制诱导的抗体可以增强非人类灵长类动物的感染，提示特定抗原表位对ADE可能存在特殊的贡献。另外，具有强中和活性的MERS-CoV单抗可以和S蛋白结合，并与细胞表面的Fc受体结合，在亚中和浓度下增强病毒对靶细胞的感染。SARS-CoV产生的抗体在高浓度下抑制病毒进入ACE2表达细胞，但在低浓度下促进病毒进入Fc受体表达细胞，进一步证明抗体浓度是影响中和作用和ADE作用的重要因素。

但是，对于SARS-CoV-2引起的COVID-19，ADE所起的作用目前尚无定论。康复者血清的治疗有效性以及灭活疫苗未观察到ADE效应，提示ADE在SARS-CoV-2感染中可能不起主要作用。但是，有文献报导抗体或抗血清可能在体外存在ADE效应，提示仍应关注ADE 的潜在风险。因此，明确SARS-CoV-2感染中是否存在ADE作用，不同种冠状病毒感染是否诱导ADE抗体，明确治疗性抗体能否产生ADE效应，疫苗是否可以诱导ADE效应，对COVID-19的预防和治疗意义重大。目前体外评价ADE效应的细胞系主要包括Raji等免疫细胞系，但具体起作用的分子仍存在争议。探明SARS-CoV-2 潜在ADE中的关键Fc受体分子，构建方便可靠的ADE评价系统则成为研究新型冠状病毒ADE的关键步骤。

发明内容

为此，本发明提供一种用于体外评价新型冠状病毒ADE效应的系统及其构建方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明实施例提供一种用于体外评价新型冠状病毒ADE效应的系统，所述系统包括免疫球蛋IgG受体FcγR的表达细胞、和/或含新型冠状病毒抗体的溶液、和/或新型冠状病毒假病毒；

其中，所述免疫球蛋IgG受体FcγR为FcγRIIA，即CD32A；

新型冠状病毒抗体促进新型冠状病毒假病毒感染免疫球蛋白IgG受体FcγRCD32A的表达细胞；

根据上述系统评价待测新型冠状病毒或新型冠状病毒抗体的ADE效应。