[发明专利]一种利用酶催化诱导适配体释放筛选酶抑制剂的高通量液晶检测平台制备方法

说明书

本发明属于分析检测领域，涉及一种利用酶催化诱导适配体释放筛选酶抑制剂的高通量液晶检测平台制备方法，包含以下的组分：载玻片、铜网、液晶分子、表面活性剂、适配体编码DNA、底物、底物特异性转化酶。本发明利用上述成分修饰液晶生物传感器，实现了对酶抑制剂的高效筛选，其效果优于目前现存筛选方法。本发明的检测方法灵敏度高，耗时短、制备方法简单、选择性良好、快速简易、成本低、无需使用大型仪器，对于高通量筛选酶抑制剂有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种筛选酶抑制剂的液晶生物传感器及对酶抑制剂的高通量筛选。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

酶抑制剂是一种可以抑制生物体内与某种疾病有关的专一酶活性，从而获得疗效的物质。酶抑制剂特异性作用于酶的某些基团，降低酶的活性甚至使酶完全丧失活性而降低酶促反应速率的物质。目前，合成药是酶抑制剂的主要来源，将高通量筛选技术与组合化学和组合生物合成技术的结合，实现了酶抑制剂的大量筛选，是世界许多大制药公司筛选酶抑制剂新药的主要渠道。

紫外可见光谱法是目前应用最广泛的酶抑制活性的评价方法。通过特定的吸光度可以测定抑制水平。然而，许多潜在抑制剂的吸收光谱会干扰读出信号，导致结果不准确。高效液相色谱法也可以用于筛选酶抑制剂，但耗时长且成本高。因此，开发一种简单、高效、低成本、灵敏度高、准确度高的潜在酶抑制剂筛选平台是非常必要的。

液晶生物传感器是一种前沿的生物传感技术，其具有构造简单、成本低、能耗低、无需标记、样品用量少、灵敏度高等优点，在生命科学、临床医学和食品安全领域展现了广阔的应用前景，逐渐引起国内外研究者的广泛关注。液晶生物传感器在小分子物质如葡萄糖、蛋白质、核酸等生物分子检测中的应用愈加广泛，具有广阔的市场化前景。液晶界面的外部刺激会引起液晶取向的变化，这些变化可以被放大并转换成特定的光学信号输出，利用这种变化可以传导信息，从而构建液晶生物传感器。适配体是一种寡核苷酸，在被其靶标识别后可以折叠成特定的构象结构。适配体因其成本低、生产方便、与靶标结合特异性强等优点，在各领域检测技术中得到了广泛的应用。

发明人发现：目前尚无一种简易平台能够对酶抑制剂进行快速、有效筛选，限制了该方向研究的发展。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种利用酶催化诱导适配体释放筛选酶抑制剂的高通量液晶检测平台的制备方法，通过分析带有液晶分子的铜网的光学信号对酶抑制剂进行高效筛选。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个方面，提供了一种利用酶催化诱导适配体释放筛选酶抑制剂的高通量液晶检测平台，包括：液晶分子、铜网、表面活性剂、小分子底物、底物适配体、底物转化特异性酶、载体；

所述载体负载有铜网；

所述铜网上依次附着有液晶分子和表面活性剂的混合物、待测制药物与底物转化特异性酶、小分子底物、适配体DNA的混合物；

其中，所述小分子底物与适配体DNA特异性结合；

底物转化特异性酶诱导适配体-特异性底物复合物的断裂。

本发明通过酶催化诱导适配体释放策略，即酶诱导适配体-特异性底物复合物的断裂来传导酶抑制剂是否有效这一信息；并结合带有液晶分子的铜网的光学信号对酶抑制剂进行高效筛选，可以对酶抑制剂进行快速、有效筛选。

本发明的第二个方面，提供了一种利用酶催化诱导适配体释放筛选酶抑制剂的高通量液晶检测平台的制备方法，包括：

将载体进行预处理；

在预处理的载体上负载铜网；