[发明专利]一种缺血性脑卒筛查试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法包括以下步骤：

步骤一，通过试剂盒制备模块进行缺血性脑卒筛查试剂盒的制备；通过血液采集模块利用血液采集程序进行患者静脉血的采集；通过血清分离模块利用血清分离程序进行采集的静脉血中血清的分离；

所述通过试剂盒制备模块进行缺血性脑卒筛查试剂盒的制备包括以下步骤：

(1.1)将下壳体平放在水平面上，在下壳体内部的底端使用固定胶水进行点涂，将底板的四个角粘贴在下壳体上并挤压出二者间的气泡，保持底板表面的平整；

(1.2)按照自下而上的顺序进行吸水层、PCR反应组件的连接，得到检测用复合垫片；将检测用复合垫片进行裁剪，并将裁剪后的复合垫片覆盖在底板上；

(1.3)使用热压工艺进行底板与复合垫片的热压，将复合垫片的边缘与底板进行完全融合；

(1.4)进行反应检测区与样品滴加区的划分并对划分的两个区域进行分别标记；将上壳体上的反应检测区、样品滴加区与下壳体内部划定的反应检测区、样品滴加区进行对应；

(1.5)部署完毕后，使用封闭胶水进行上壳体与下壳体连接处的涂擦，胶水凝固得到缺血性脑卒筛查试剂盒；

步骤二，通过DNA提取模块利用DNA提取程序进行分离的血清中DNA的提取；将提取的DNA滴加至试剂盒的样品滴加区；

步骤三，通过PCR扩增模块利用制备得到的试剂盒进行PCR扩增，得到反应结束后的试剂盒；

步骤四，将试剂盒转移至实验室，进行PCR纯化，并通过PCR测序模块利用PCR测序程序进行PCR测序；

步骤五，通过测序结果分析模块利用测序结果分析程序进行测序结果的分析，得到miR-98的表达水平；

步骤六，通过风险提示模块利用风险提示程序在miR-98的表达水平低于阈值时进行缺血性脑卒风险的提示。

2.如权利要求1所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤(1.3)中，所述使用热压工艺进行底板与复合垫片的热压，包括：

1)设定热压机进行热压的模式为区域热压，以及设定热压方式为区域轮廓热压；

2)设定区域轮廓为长方形，且所述长方形的长、宽规格依据复合垫片的规格确定；

3)开启热压机，进行预热压；

4)预热压结束后进行热压处理，静置晾凉；

5)对晾凉后的垫片进行检查，查看热压部位密实度，若密实度较差则再次进行热压。

3.如权利要求2所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，所述预热压的温度为80～85℃，预热压时间为2～5s。

4.如权利要求2所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，所述热压的温度为110～130℃，预热压时间为3～6s。

5.如权利要求1所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，所述使用封闭胶水进行上壳体与下壳体连接处的涂擦，胶水凝固得到缺血性脑卒筛查试剂盒之后还需进行：

将得到缺血性脑卒筛查试剂盒表面进行覆膜，连同产品说明书装入包装盒中。

6.如权利要求1所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤一中，所述通过血清分离模块利用血清分离程序进行采集的静脉血中血清的分离，包括：

步骤Ⅰ，将采集的静脉血置于采血管内，进行10～25min恒温静置；

步骤Ⅱ，设定离心转速为800～900r/min，将静置后的静脉血进行离心；

步骤Ⅲ，离心结束后，将采血管置于37℃水中水浴静置；

步骤Ⅳ，对采血管内的物质进行纤维蛋白原剥离；

步骤Ⅴ，进行沉淀。

7.如权利要求1所述缺血性脑卒筛查试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤四中，所述PCR纯化包括：在试剂盒中构建PCR纯化体系设定，反应条件为37℃反应20min，68℃反应20min。