[发明专利]脂质包覆碳酸钙载体负载Ce6的制剂及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及脂质包覆碳酸钙载体负载Ce6的制剂及其制备方法与应用。本发明提供的Li/CC‑Ce6，具有良好的稳定性，生物相容性和肿瘤靶向性，在激光刺激下可有效产生ROS。ROS可以触发细胞凋亡以暴露TAA，并有望通过炎症模拟机制将DC募集到肿瘤组织中。DC被原位激活以释放相应的炎症(包括IL‑6和TNF‑α)并触发随后的免疫应答级联反应。体外和体内实验均表明该平台具有增强DC疫苗接种的强大能力，可有效抑制原发性和远处生长的肿瘤的生长，这可能是有效治疗癌症的新方法。

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及脂质包覆碳酸钙载体负载Ce6的制剂及其制备方法与应用。

背景技术

癌症的免疫疗法是一类新颖的疗法，包括癌症疫苗、免疫检查点疗法和其他T细胞疗法。特别地，与其他方法相比，具有不可替代的优势(如制备简单、成本低廉)的癌症疫苗被广泛认为是潜在的癌症治疗方法。最近的研究逐渐揭示了树突状细胞(DCs)在激活T细胞和触发免疫反应中的关键功能，这对于免疫疗法是必不可少的。先前的多项研究集中在寻找用于癌症免疫治疗的疫苗。但是，当前可用的癌症疫苗通常需要复杂的血液制品的加工过程才能提供抗原/佐剂来满足受试者的疫苗接种要求。因此，能有最大限度地减少所需的加工程序以提供强大的免疫反应和出色的抗癌作用的智能人工疫苗是非常困难的，但也非常值得期待。

近年，纳米技术的使用提供了制备基于DC的癌症疫苗的有效方法。特别是碳酸钙(calcium carbonate,CC)纳米颗粒是使用最广泛的材料之一，它显示出多维优势，包括高度的可行性，易于制造和良好的载药量。因此，CC被公认为是药物和基因传递的适合载体，许多药物传递系统(drug delivery systems，DDSs)已成功地使用CC作为骨架开发出令人满意的结果。此外，肿瘤相关的增强渗透效应(enhanced permeability and retention，EPR)与阳性靶向修饰的组合，靶向肿瘤的药物递送变得越来越可评估。尽管如此，为了获得可接受的治疗效果，先前的报道中经常需要重复高剂量DDSs的给药。因此，迫切需要能够提供免疫反应功效的新型药物载体。

以前的研究表明光动力疗法(photodynamic therapy，PDT)具有破坏肿瘤组织的完整性的巨大潜能，在此治疗期间活性氧(reactive oxygen,ROS)也能够有效杀死癌细胞以诱导显著的细胞凋亡并暴漏肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)。此外，还有报道自然炎症反应也以高水平的ROS为特征。结果表明，由人工PDT产生的ROS能够模拟人体的炎症反应，以募集包括DC在内的免疫相关细胞。PDT后未巩固的肿瘤组织有利于树突状细胞(dendritic cells，DCs)的分布和渗透以进行免疫接种。暴漏的TAA能够激活DC以满足原位免疫接种，这比传统的给药途径更有效地减少了有效免疫疗法的给药剂量和周期。因此，制备脂质包覆碳酸钙载体负载光动力治疗药物的制剂，有可能进一步提高肿瘤免疫疗法的疗效，并降低给药量、缩短治疗周期。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供脂质包覆碳酸钙载体负载Ce6的制剂(Li/CC-Ce6)及其制备方法与应用，该制剂可以作为有效的结肠癌免疫疗法的潜在原位疫苗。

本发明提供了一种Li/CC-Ce6的制备方法，其包括：

将CTAB、正丁醇和正己烷混合，制得正己烷乳液；

将氯化钙水溶液、Ce6水溶液和所述正己烷乳液混合，制成反相微乳液A；

将碳酸钠水溶液、DOPA水溶液和所述正己烷乳液混合，制成反相微乳液B；

将所述反相微乳液A和反相微乳液B混合后，经乙醇沉淀，获得DOPA改性的CC-Ce6；

在有机溶剂中加入所述DOPA改性的CC-Ce6、DOPC、FA-DSPE-PEG和胆固醇，去除溶剂后以PBS分散，获得含有Li/CC-Ce6的溶液；