[发明专利]一种酶处理辅助提取微拟球藻EPA极性脂的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种酶处理辅助提取微拟球藻EPA极性脂的方法。包括如下步骤：步骤一、利用漆酶处理微拟球藻，得到微拟球藻酶解混悬液；步骤二、将所述微拟球藻酶解混悬液经离心，去除上层清液，取下层沉淀烘干干燥，即得微拟球藻酶解破壁藻粉；步骤三、将所述微拟球藻破壁藻粉进行亚临界萃取，得到微拟球藻极性脂提取液；步骤四、将微拟球藻极性脂提取液经离心，取上层清液，经真空蒸发去除溶剂，即得微拟球藻EPA极性脂。该微拟球藻EPA极性脂的制备工艺安全，方法便捷，且EPA极性脂提取率相对于现有技术显著提高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种酶处理辅助提取微拟球藻EPA极性脂的方法。

背景技术

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid，EPA)，作为一种人体所无法合成的ω-3系列的多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids PUFAs)，具有预防老年痴呆、防止大脑功能衰退、增强免疫能力、抑制内源性胆固醇和甘油三酯的合成、增加脂蛋白脂酶的活性等生物活性。目前大多数的EPA产品主要以深海鱼油、南极磷虾油等作为原料提取。

微拟球藻细胞壁主要由纤维素、半纤维素、木质素组成，细胞壁为三层结构，强度是植物细胞壁的数倍，结构复杂且坚韧的细胞壁使有机溶剂的提取效率降低。为分解微藻细胞壁，可以选择高压均质化、超声等机械法、酸水解法和酶解法进行细胞破碎。与其他方法相比，酶解法具有温和的水解条件减少微藻中多不饱和脂肪酸的氧化、底物专一选择性防止微藻细胞过度破碎、低能耗和设备简单等优势。

目前，国内外提取微藻脂质的方法主要有CO₂超临界萃取法、有机溶剂萃取法等，但现有工艺提取的到的大多为微藻的总脂，且由于现有的工艺条件和技术限制，以及微拟球藻细胞壁的影响，暂时无法从微拟球藻中直接得到纯度较高的EPA极性脂。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供了一种酶处理辅助提取微拟球藻EPA极性脂的方法，通过对酶种类进行重新选择，并对酶解工艺以及整体提取方法步骤进行重新设计和优化，最终打破了传统微拟球藻细胞壁的影响，有效增加了微拟球藻极性脂提取率，以解决现有技术无法从微拟球藻中直接得到纯度较高的EPA极性脂的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种酶处理辅助提取微拟球藻EPA极性脂的方法，包括如下步骤：

步骤一、将微拟球藻与酶和缓冲溶液混合进行酶解，得到微拟球藻酶解混悬液；所述酶包括漆酶；

步骤二、将所述微拟球藻酶解混悬液经离心，去除上层清液，取下层沉淀进行干燥，即得微拟球藻酶解破壁藻粉；

步骤三、将所述微拟球藻酶解破壁藻粉进行亚临界萃取，即得微拟球藻极性脂提取液；

步骤四、将所述微拟球藻极性脂提取液经离心，取上层清液，经真空蒸发去除溶剂，即得微拟球藻含EPA极性脂。

优选地，步骤一所述酶包括漆酶和纤维素酶。

优选地，步骤一所述酶为漆酶-纤维素酶复合酶。

优选地，酶解时所述漆酶与纤维素酶的酶活性比为0.1～1.0U/ml:100～500U/ml。

优选地，所述缓冲溶液为pH＝4.2～5.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，所述微拟球藻与缓冲溶液的固液比为1:5～10。

优选地，所述缓冲溶液为pH＝5.0～5.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。

优选地，步骤一在40～60℃下酶解1～6小时。

优选地，步骤一在48～52℃下酶解2.8～3.2小时。

优选地，步骤二中离心条件为：离心转速3000～4000r/min，离心时间10～20分钟；干燥条件为：干燥温度55～65℃，干燥时间8～16小时。