[发明专利]白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用

说明书

本发明公开了一种白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用，属于植物基因工程技术领域，利用白菜型油菜Bra014815基因第二个外显子上的196bp片段以及pHELLSGATE 12载体构建了Bra014815基因的RNAi载体，通过农杆菌介导的蘸花法(Floral‑dip)转化白菜型油菜植株，可以使白菜型油菜分枝数显著增加，株高相应降低，顶端优势减弱，分枝部位的节间距缩短。该白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用，通过提供白菜型油菜中调控植物分枝的Bra014815基因，构建含该基因片段的RNAi载体，并通过转基因技术将该基因片段转入白菜型油菜，能有效地增加白菜型油菜的分枝，并表明白菜型油菜Bra014815基因能够作为白菜型油菜分枝发育的调控因子，为研究植物分枝调控机制提供了借鉴，同时获得的多分枝转基因白菜型油菜是多分枝，抗倒伏、适应机械化生产的良好株型品种。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体为一种白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用。

背景技术

芸薹属为十字花科植物，包含许多重要的蔬菜、油料作物，如白菜型油菜，甘蓝，油菜，花椰菜等等，其中白菜型油菜(Brassica campestris L.)是十字花科芸薹属芸薹种的白菜型油菜亚种，是我国的原产蔬菜，栽培历史悠久，种类繁多，营养丰富，是日常一种主要的蔬菜。

RNA干扰是由双链RNA诱导产生的基因沉默现象，它可以在转录水平和转录后水平发挥作用，与靶基因序列同源的小片段干扰RNA，高效和特异性地使mRNA降解，从而导致内源靶标基因的沉默，最终产生相应功能的表型缺失。自RNAi现象发现以来，RNAi技术被广泛运用于植物遗传改良及作物育种，且取得了重大进展。

植物的顶端优势和侧枝发育在植物形态建成中扮演重要角色，它决定了植株的高度、伸展度等形态指标，也影响生物量及结实量等经济指标。研究表明，高杆材料易倒伏，而矮杆材料往往产量降低，培养具有抗倒伏、适应机械化生产的新品种就成了解决以上问题的关键。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用，包括以下具体步骤：

S1、选择植物材料与载体、菌株；

S2、将植物材料的新鲜白菜型油菜花苞立即放入液氮，根据生工Sangon Biotech总RNA提取试剂盒提取白菜型油菜总RNA，根据诺唯赞反转录试剂盒合成cDNA第一链；

S3、在NCBI获得Bra014815的参考序列，在第二个外显子上设计产物为196bp的引物，在引物5`端加上pHELLSGATE 12RNAi载体的接头序列，用该引物扩增目的片段并进行琼脂糖凝胶电泳；

S4、将目的片段进行胶回收，连接pHELLSGATE 12载体，在环境温度在25℃的环境下2小时之后加入1μl的K蛋白，在环境温度在37℃的环境下反应10分钟；

S5、将连接产物转化DH5α大肠杆菌，37℃下倒置培养12h后，进行测序验证；

S6、将测序正确的重组质粒转化农杆菌GV3101，挑取单克隆在试管中摇菌24h，之后转大摇，扩大培养：在无菌的锥形瓶中加入100ml含SPE抗生素的YEB培养基，将试管中的菌液转入锥形瓶中，继续摇菌至OD₆₀₀＝0.8～1.0；

S7、将培养好的菌液分装于50ml离心管中，室温下4000rpm离心10分钟，弃去上清液，用配好的重悬液对50ml离心管中沉淀的菌体进行重悬浮，并用重悬液调整菌液浓度至OD₆₀₀＝0.8～1.0；