[发明专利]白菜型油菜Bra014815基因在调控分枝数和株型上的应用

权利要求书

1.一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，包括以下具体步骤：

S1、选择植物材料与载体、菌株；

S2、将植物材料的新鲜白菜型油菜花苞立即放入液氮，根据生工Sangon Biotech总RNA提取试剂盒提取白菜型油菜总RNA，根据诺唯赞反转录试剂盒合成cDNA第一链；

S3、在NCBI获得 Bra014815 的参考序列，在第二个外显子上设计产物为196bp的引物，在引物5`端加上pHELLSGATE 12 RNAi载体的接头序列，用该引物扩增目的片段并进行琼脂糖凝胶电泳；

S4、将目的片段进行胶回收，连接pHELLSGATE 12 载体，在环境温度在25℃的环境下2小时之后加入1μl的K蛋白，在环境温度在37℃的环境下反应10分钟；

S5、将连接产物转化DH5α大肠杆菌，37℃下倒置培养12h后，进行测序验证；

S6、将测序正确的重组质粒转化农杆菌GV3101，挑取单克隆在试管中摇菌24h，之后转大摇：在无菌的锥形瓶中加入100ml含SPE抗生素的YEB培养基，将试管中的菌液转入锥形瓶中，继续摇菌至OD600nm=0.8~1.0；

S7、将培养好的菌液分装于50ml离心管中，室温下4000rpm离心10分钟，弃去上清液，用配好的重悬液对50ml离心管中沉淀的菌体进行重悬浮，并用重悬液调整菌液浓度至OD600nm=0.8~1.0；

S8、白菜型油菜培养至4~5周，在开花前期，去掉已经完全开放的花朵，留下待开的花苞，用镊子将每个花苞拨开一个开口，以便随后浸染时菌液可以进入；

S9、对RNAi Bra014815转基因白菜型油菜的筛选和鉴定；

S10、对RNAi Bra014815转基因白菜型油菜的表型进行分析。

2.根据权利要求1所述的一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，所述S5中，测序验证的方法为选取单克隆菌落摇菌、提质粒，在载体上目的片段插入位置两端设计引物，PCR验证目的基因是否成功连入载体，并对重组质粒进行测序验证。

3.根据权利要求1所述的一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，所述S7中，重悬液的配置方法为用含5％蔗糖的1/2MS液体培养基，加入50mg/L的乙酰丁香酮AS，并加入0.02％表面活性剂Silwet L-77。

4.根据权利要求1所述的一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，所述S8中，倾斜植株，把花序逐次浸入菌液中20秒，期间晃动在菌液中的花序，浸染完成后用清水喷洒花序并完成套袋。

5.根据权利要求4所述的一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，完成套袋后把浸染过的植株避光24h，24h后恢复正常培养条件，五天之后，对新出现的待开花苞拨开小口，并把不适合浸染的花苞去除。

6.根据权利要求5所述的一种白菜型油菜Bra014815基因在调控白菜型油菜分枝数和株型上的应用，其特征在于，把不适合浸染的花苞去除后，按照同样的方法进行第二次的侵染。