[发明专利]一种对叶大戟果实中大环二萜类化合物组分的提取分离方法和用途

说明书

本发明涉及一种对叶大戟果实中大环二萜类化合物组分的提取分离方法和用途，该化合物以对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)成熟果实为原料，采用溶剂提取，溶剂萃取，硅胶柱层析进行分离，得到大环二萜类化合物组分1‑8，经过高效液相色谱分析，该组分中大环二萜类化合物含量超过60%。通过对该组分1‑8的活性测试，其表现出较强的多药耐药逆转活性，与抗肿瘤药物联用可一定程度逆转耐药细胞对抗肿瘤药物的耐药性，可用作多药耐药逆转药物。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及大环二萜类化合物组分提取分离方法及其在制备多药耐药逆转药物或与抗肿瘤药物组合用药中的用途。

背景技术

对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)是大戟科(Euphorbiaceae)大戟属(Euphorbia)一年生草本植物，产于亚洲大陆中部，在我国主要分布于新疆和田、昌吉等地，其成熟果实为维吾尔民族药的常用药材。该植物在苏孜阿甫片、复方苏孜阿甫蜜膏、加瓦日西库木尼、依力提提蜜膏、苏孜阿甫软膏、苏扎甫散、赛拉尼散等十几种成熟的民族医复方药中作为主要成分应用于临床。目前，从该植物中分离及鉴定的化合物类型主要有倍半萜、二萜、三萜、甾醇、脂肪酸、黄酮、酚类和糖类等。

目前从对叶大戟全草及果实中分离得到的二萜类化合物主要为假白榄烷(Jatrophane)型大环二萜化合物，假白榄烷型大环二萜化合物的结构特点是其骨架由一个五元环和一个十二元环稠合而成，即5/12环系。该类化合物结构复杂，多数高度之酯化，具有取代基种类多，如乙酰氧基(-OAc)、丙酰氧基(-OPr)、异丁酰氧基(-OiBu)、苯甲酰氧基(-OBz)及吡啶酰氧-3-基(-ONic)等，且取代基数量多(通常在3-8个)、分子量大的特点。而且据报道，大多数假白榄烷型大环二萜化合物具有不同程度的肿瘤多药耐药逆转活性。

现有技术中，对药材对叶大戟果实的大环二萜类化合物组分收率较低，且组分中大环二萜类化合物总含量不高，该现状制约了工业化生产发展，不能满足现代化工业生产的需要，阻碍了该药材的深度开发。

肿瘤多药耐药是一种药物作用于肿瘤使之产生耐药性后，该肿瘤对从未接触、结构无关、靶点不同、机制各异的多种抗肿瘤药也具有交叉耐药性的现象。多药耐药有多种形成机制，如拓扑异构酶异常、蛋白激酶C过表达、ABC家族转运蛋白过表达等，其中最主要且研究最广泛、最深入的为ABCB1基因编码的P-糖蛋白的过表达，导致药物外排增加，形成耐药性。因此肿瘤多药耐药是化学药物治疗肿瘤失败的主要原因之一。多药耐药逆转药物已出现三代，逆转活性弱及高毒性是其未大规模推广使用的原因。近年来，因植物药物具有低毒性的特点，许多从植物中分离得到的假白榄烷型大环二萜类化合物被发现具有显著的MDR逆转活性而成为研究热点。本研究考察大环二萜类化合物组分与传统抗肿瘤药物联用后，能否通过竞争性结合耐药细胞膜上的转运蛋白，充当其底物，达到逆转耐药细胞耐药性的目的，使得传统抗肿瘤药物能够在细胞内发挥杀伤肿瘤细胞的作用，用于评价该化合物组分的活性及有效性。

发明内容

本发明目的在于，提供一种对叶大戟果实中大环二萜类化合物组分的提取分离方法和用途。该化合物以对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)成熟果实为原料，采用溶剂提取，溶剂萃取，硅胶柱层析进行分离，得到大环二萜类化合物组分1-8，经过高效液相色谱分析，该组分中大环二萜类化合物含量超过60％。通过对该组分1-8的活性测试，其表现出较强的多药耐药逆转活性，与抗肿瘤药物联用可一定程度逆转耐药细胞对抗肿瘤药物的耐药性，可用作多药耐药逆转药物。

本发明所述的一种对叶大戟果实中大环二萜类化合物组分的提取分离方法，按下列步骤进行：

a.以对叶大戟的果实为原料，自然晾干，破碎后用5-10倍体积的浓度为50-99％的乙醇水溶液、无水乙醇、丙酮、体积浓度为50-99％的甲醇水溶液或无水甲醇在室温下进行渗漉、冷浸或加热回流提取，浓缩，得到对叶大戟果实的提取物；