[发明专利]一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法

权利要求书

1.一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，包括：

1)采用三氯甲烷：甲醇混合溶液从乳样中分离提取得到脂质成分；其中，乳样包括生牛乳和生羊乳；

2)采用液相色谱对步骤1)所得脂质成分进行柱分离，实现对步骤1)所得脂质成分进行纯化，采用高通量质谱技术对纯化后的脂质成分进行信息采集，得到脂质成分的峰表；

3)对步骤2)所得脂质成分的峰表中信息进行统计学差异分析，得到乳样中显著性表达脂质成分中的磷脂酰胆碱；对步骤2)所得脂质成分的峰表中信息进行化学计量分析，得到用于羊乳掺伪的差异磷脂酰胆碱作为标志物；

4)将步骤3)所得用于羊乳掺伪的差异磷脂酰胆碱进行定量分析，用于待鉴别样品的检测，实现牛羊乳掺伪鉴别。

2.根据权利要求1所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤1)中，采用三氯甲烷：甲醇混合溶液从乳样中分离提取得到脂质成分，具体包括以下操作：

将体积比为1:2的三氯甲烷：甲醇混合溶液加入乳样中后涡旋混合，得到混合体系A，向所得混合体系A中加入三氯甲烷后涡旋混合，得到混合体系B，向所得混合体系B中加入水后涡旋混合，得到混合体系C，将所得混合体系C经冷冻离心，留取下层溶剂，过滤所得下层溶剂，得到脂质成分。

3.根据权利要求2所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，体积比为1:2的三氯甲烷：甲醇混合溶液、乳样、三氯甲烷、水的体积比为3～4：0.2～0.5：2～2.5：1～1.5；

涡旋混合时间为60s；

冷冻离心为在4℃下以5200rpm离心15～20min。

4.根据权利要求1所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤2)中，液相色谱分离的检测条件为：

色谱柱采用Accucore C30；

洗脱体系由体积比为60:40的乙腈：水和体积比为90:10:1的异丙醇：乙腈：水组成，两个缓冲溶液均含有6～10mmol/L NH₄HCO₂和0.1％～0.2％HCOOH，以0.2～0.3mL/min的流速对步骤1)所得脂质成分进行洗脱。

5.根据权利要求1所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤2)中，采用高通量质谱技术在dd/MS2扫描模式下对纯化后的脂质成分进行信息采集，具体检测参数为：鞘气：30～45，辅助气：2～5，喷雾电压：3～3.5kV，毛细管温度：300～350℃；采集质量范围：200～2000m/z。

6.根据权利要求1所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤3)中，使用Fold change和T-test检验对步骤2)所得脂质成分的峰表中信息进行统计学差异分析；

步骤3)中，基于化学计量分析，构建主成分和偏最小二乘判别分析模型，实现所得乳样中显著性表达脂质成分中的磷脂酰胆碱的聚类和差异可视化。

7.根据权利要求6所述的一种基于磷脂酰胆碱的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，以R²和Q²评价所构建主成分和偏最小二乘判别分析模型的质量。