[发明专利]一种NK细胞的制备及治疗癌症中的应用

说明书

本发明涉及一种NK细胞的制备及其在治疗癌症中的应用。本发明提供了一种将NK细胞与CD105的单克隆抗体一起制备成为药物组合物，可以用于治疗结直肠癌，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及制药领域，更具体的涉及一种NK细胞的制备及其在治疗癌症中的应用。

背景技术

NK细胞是具有多种免疫学功能的淋巴样细胞,人类NK细胞为CD56和CD16阳性.CD3和CD19为阴性。少部分NK细胞可以为CD8阳性。NK细胞杀伤肿瘤细胞不受MHC限制，也不需预先与抗原接触或显示任何记忆反应。NK细胞对肿瘤的杀伤优势表现为直接溶解和分泌细胞因子两个方面，其杀伤肿瘤既可通过穿孔素又可通过Fas配基。NK细胞可以产生TNF-a、IFN-γ和IL-1，这些细胞因子在NK细胞抗癌反应中有十分重要地位。NK细胞具有对异体骨髓快速排异的能力，但并不介导实体组织的移植排异。

在肿瘤的发生、发展过程中，NK细胞既可以通过“内识别”方式(如NCRs、NKG2D、SLAMs、DNAMs等)直接识别恶性转化癌细胞并被活化，也可以在辅助细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等)的作用下被活化。这些辅助细胞通过其模式识别受体(包括细胞表面受体TLR2、TLR4，胞内胞质受体RIG-1、NALP3、NOD2，内体受体TLR7、TLR9等识别多种病原体)来应答内外环境的变化，再通过分泌多种可溶性因子或直接接触的方式将信号传递至NK细胞，使NK细胞得以发挥其杀伤功能及分泌炎性细胞因子功能。在人类，已经证实存在的可溶性因子有IL-12、IL-18、IFN、IL-2及TNF；直接接触的分子有GITRL/GITR、IL-12/IL-12R、CD48/2B4、MICAorMICBorULBP1-ULBP3/NKG2D、AICL/NKp80、IL-15R-IL-15/IL-15βγ等。

采用NK细胞治疗肿瘤不仅可使用刺激因子(如IL-2、IL-12、IL-15等)，也可以使用针对NK细胞的KIR的阻断剂。同时亦提示，阻断NK细胞的KIR的功能与采用阻断CTLA4对T细胞的阴性信号一样可以提高机体的抗癌免疫反应。上述资料提示，活化NK细胞既可以直接进行过继输注治疗肿瘤，亦可阻断这些NK细胞的KIR以提高其抗癌效应。

最近，几种方法提高NK细胞的体外扩增，体内持续存在，促进向肿瘤微环境归巢，增加了其抗肿瘤作用。早期NK细胞扩增方法使用的培养液仅含有细胞因子，如IL-2和IL-15，只有10-20倍的扩增。随后使用饲养细胞联合细胞因子，增殖可达80-10000倍，尤其使用CD3枯竭的PBMC进行培养。最近使用CD3耗竭的单采产物，使用无饲养细胞和MEM-α培养基，含有IL-2，IL-15和维生素B3，可获得纯度95％的NK细胞。IL-15促进NK细胞生长，增殖，而不激活Treg细胞。异二聚体IL-15(IL-15-sIL-15Rα)可更有效刺激NK细胞增殖。NK细胞表达IL-12Rβ2，高剂量IL-12对NK细胞具有免疫调节作用，并促进IFN-γ的产生。免疫调节药来那度胺间接通过IL-2和IFN-γ提高NK细胞的增殖和细胞毒作用。当PD1和PDL1-特异性单克隆抗体与来那度胺联合，增强NK细胞抗骨髓瘤的能力。PD1阻断药物可提高NK细胞诱导的ADCC以及NK细胞向肿瘤的迁徙，同时抑制Treg细胞的功能。NK细胞的死亡配体TRAIL，可诱导TRAILR表达阳性的肿瘤细胞凋亡，组蛋白乙酰化酶和蛋白酶体抑制剂可增强此通路的功能。Ⅰ期临床试验，bortezomib与自体NK细胞联合，导致难治性肾细胞癌和慢性白血病出现肿瘤消退。

结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，据统计发病率在全球范围内位于恶性肿瘤第3位，在西方国家和中国的经济发达地区已经上升为第2位。结直肠癌也是全球癌症导致死亡的主要原因之一。虽然贝伐单抗已经在大肠癌领域得到了广泛的应用，但贝伐单抗的毒副反应包括出血、血栓性事件也引起了人们的重视。因此，开发一种新的能够治疗大肠癌(结直肠癌)的单克隆抗体仍然有很大的应用价值。特别是使用NK细胞与单克隆抗体一起使用，是目前联合治疗的的重点方向。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种有效治疗大肠癌特别是结直肠癌的新的方法。