[发明专利]一种乳双歧杆菌高密度发酵培养基及发酵方法

说明书

本发明公开了一种乳双歧杆菌高密度发酵培养基及发酵方法，属于发酵工程技术领域。本发明的高密度发酵培养基配方为：乳糖20‑30g/L、牛肉浸粉10‑15g/L、酵母浸粉10‑15g/L、牛骨蛋白胨5‑10g/L、磷酸氢二钾2‑5g/L、柠檬酸氢铵2‑5g/L、乙酸钠2‑5g/L、硫酸镁0.2‑0.5g/L、硫酸锰0.1‑0.2g/L、吐温‑80 1‑2mL/L、L‑半胱氨酸盐酸盐1‑2g/L。本发明的高密度发酵方法为：将乳双歧杆菌种子液接种到高密度发酵培养基中进行发酵，发酵过程中流加中和剂的任一种维持发酵液pH值为5.5～6.0。本发明实现了乳双歧杆菌的高密度发酵，降低了生产成本、提高了生产效率。

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种乳双歧杆菌高密度发酵培养基及发酵方法。

背景技术

乳双歧杆菌是人体肠道中常见的益生菌，也是世界上广泛研究的益生菌菌种之一。乳双歧杆菌可以产生乙酸、乳酸，来抑制肠道腐败菌的生长和有毒代谢产物的形成，从而调整肠道菌群，同时乳双歧杆菌还能刺激肠道蠕动，从而缓解便秘的症状。另外，乳双歧杆菌可以促进人体对乳糖的消化，从而缓解因为乳糖不耐受而引起的肠痉挛、肠胀气以及腹泻的症状。

在生物技术转化过程中，低成本转化、规模化和工业化，是面临的主要问题。本发明针对乳双歧杆菌大规模工业化中遇到的生产成本高、发酵技术工艺流程复杂等问题，通过对发酵培养基成分及发酵过程工艺控制进行摸索，实现了乳双歧杆菌的高密度发酵。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种乳双歧杆菌高密度发酵培养基及发酵方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种乳双歧杆菌高密度发酵培养基，其配方如下：乳糖20-30g/L、牛肉浸粉10-15g/L、酵母浸粉10-15g/L、牛骨蛋白胨5-10g/L、磷酸氢二钾2-5g/L、柠檬酸氢铵2-5g/L、乙酸钠2-5g/L、硫酸镁0.2-0.5g/L、硫酸锰0.1-0.2g/L、吐温-80 1-2mL/L、L-半胱氨酸盐酸盐1-2g/L。

优选的，所述的乳双歧杆菌高密度发酵培养基的配方如下：乳糖20g/L、牛肉浸粉10g/L、酵母浸粉10g/L、牛骨蛋白胨10g/L、磷酸氢二钾3g/L、柠檬酸氢铵3g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.1g/L、吐温-80 1mL/L、L-半胱氨酸盐酸盐1g/L。

一种乳双歧杆菌高密度发酵方法，包括如下步骤：将乳双歧杆菌种子液接种到上述高密度发酵培养基中，在温度37～39℃、转速50～100rpm条件下发酵12～18小时；发酵过程中流加中和剂维持发酵液pH值为5.5～6.0；发酵过程不通气或通入N₂；当发酵液在600nm波长下的吸光值（OD₆₀₀）不再增加时，终止发酵。所述的中和剂优选为氨水、Na₂CO₃或NaOH中的任一种。

所述的乳双歧杆菌种子液优选通过包括如下步骤的方法制备：将冷冻保存的乳双歧杆菌取出接种到5mL的MARS培养基中，在37℃、厌氧条件下进行活化培养；待到24h后，将菌液以2%（V/V）的接种量再接种于MARS培养基中（二代），在37℃、厌氧条件下培养12h后，再以2%的接种量接入MARS培养基中（三代），于37℃、厌氧条件下培养12h后作为种子液。